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硝苯地平片的含量测定方案 一、设计背景 硝苯地平是一种二氢吡啶类钙拮抗剂抗高血压药，适用于各种类型的高血压，对顽固 性、重度高血压也有较好疗效，由于能降低后负荷，对顽固性充血性心力衰竭也有良好疗 效，可以长期服用。临床上常用于预防和治疗冠心病心绞痛，特别是变异型心绞痛和冠状 动脉痉挛所致心绞痛效果好，对呼吸功能无不良影响，疗效优于β受体拮抗剂，尤其适用 于患有呼吸道阻塞性疾病的心绞痛患者。硝苯地平片中主要发挥药效的成分是硝苯地平， 其含量又是决定药品是否合格的重要因素。药品的含量是指药物中有效成分的数量。药品 的含量是评定药品质量的主要指标之一。设计其含量测定方法时，应根据药品性质特点、 剂型、处方等多个方面综合考虑。根据 《中国药典》2020版二部记载，建立测试硝苯地 平的高效液相色谱法。硝苯地平的化学名是1,4-二氢-2,6-二甲基-4-(2-硝基苯基)-3,5- 吡啶二羧酸二甲酯，结构如下。 二、设计依据 本方案主要是参考 《中国药典》2020版二部和四部的通则中高效液相色谱法 （中国 药典通则0512）测定。根据药典规定，硝苯地平片的含量测定包括色谱条件、系统适用 性实验要求以及测定方法；色谱条件是十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水 （60： 40）为流动相；检测波长为235nm；进样体积20μl。 三、设计方案 1.仪器与试药 （1）仪器 高效液相色谱仪、电子分析天平、研钵、50ml棕色量瓶、100ml棕色量瓶、超声仪、 移液管、洗耳球、胶头滴管、烧杯、玻璃棒、0.45μm滤膜、滤纸、棕色试剂瓶。 （2）试剂 硝苯地平片、硝苯地平对照品（中国食品药品检定研究院）、甲醇（色谱纯）、高纯水、 三氯甲烷。 2. 色谱条件 （1）色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶。 （2）流动相：甲醇-水 （60:40）。 （3）检测波长：235nm。 （4）柱温：40℃。 （5）进样量：20μl。 （6）流速：1.2ml/min。 （7）避光操作。 3.供试品溶液的制备 清洁天平。取硝苯地平片20片，除去包衣，置天平上，精密称定，记录20片总重。 倒入研钵中，充分研磨成粉末，精密称取约相当等于硝苯地平10mg的片粉，置于l棕色 50ml量瓶中，加甲醇30ml，超声10分钟使硝苯地平片溶解，放冷至室温，用甲醇稀释至 刻度，摇匀，用0.45μm滤膜滤过，精密量取续滤液5ml，置于50ml棕色量瓶中，加甲 醇稀释至刻度，摇匀，制备成每1ml中约含硝苯地平20μg的溶液。 4.对照品溶液的制备 精密称取硝苯地平对照品10mg，置于50ml的棕色量瓶中，用甲醇溶解，并稀释至刻 度线，摇匀，制成每1ml中约含硝苯地平200μg的溶液作为贮备液。临用前精密量取贮 备液5ml，置于50ml棕色量瓶中，加甲醇稀释至刻度线，摇匀，制备成每 1ml中约含硝 苯地平20μg的溶液。 5.线性关系考察 避光操作。精密称取105℃干燥至恒重的硝苯地平对照品25 mg，置25 ml棕色容量 瓶中，先加三氯甲烷2 ml振摇使溶解，再用甲醇稀释到刻度线，摇匀。精密量取10 ml 置100ml棕色容量瓶中用甲醇稀释至刻度线，摇匀。分别精密量取上述稀释液0.50、2.0、 4.0、6.0、8.0、10.0ml置50 ml棕色容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，配制成浓度为 1mg/L-20mg/L 的系列溶液,进样20μl,以峰面积(Y)对硝苯地平对照品浓度X(mg /L )进 行线性回归,得直线方程Y 9. 9722X-1.4545,r 0.9999,说明硝苯地平在1 ～30 mg/L范 围内线性关系良好。 6. 稳定性试验 取硝苯地平对照品适量,避光操作,分别用甲醇配制含硝苯地平5.0、10.0、15.0、20.0 mg/ L 四个不同的浓度,在配制后0 h、2 h、4 h、6 h、8 h进样,进样量为20 μl，测定 峰面积，结果RSD分别为0.54%、0.40%、0.92%、0.87%(n 3),日间平均变异系数为0.68% , 表明供试品溶液在8h 内稳定，结果见表1。 表1 稳定性试验结果 （n 3） 测得值mg/L 样品