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HPLC法测定对乙酰氨基酚含量验证方案 一、设计背景 随着药品行业的快速发展，使得药检在医药在医药行业的地位占据着重要的位置。对乙酰氨基酚是乙酰苯胺类解热镇痛药（又名“扑热息痛”），呈白色晶体或晶体性粉末，该药品味道微苦，临床上用于治疗头痛、肌肉及关节痛等症状。对乙酰氨基酚其解热作用与阿司匹林相似，而镇痛作用较弱，本品因仅能缓解症状，消炎作用极微，且不能消除关节炎引起的红、肿、活动障碍，故不能用以代替阿司匹林或其他非甾体抗炎药治疗各种类型关节炎，但本品可用于对阿司匹林过敏、不耐受或不适于应用阿司匹林的病例。是一种非甾体解热镇痛抗炎药。 二、设计依据 通过查阅相关网站关于“对乙酰氨基酚”的相关文献资料，对乙酰氨基酚本品化学名为N-（4-羟基苯基）乙酰胺，按干燥品计算，含量应为98.0％－102.0％；其中对其药理的规定，抑制中枢神经系统前列腺素合成的作用与阿司匹林相似，但抑制外周前列腺素合成作用弱，故解热镇痛作用强，抗风湿作用弱，对血小板凝血机制无影响。 口服吸收迅速，完全，在体液内分布均匀，大部分在肝脏代谢，中间代谢产物对肝脏有毒，以葡萄糖醛酸结合物形式或从肾脏排泄，半衰期一般为1-4小时。仅对轻、中度疼痛有效。本品无明显抗炎作用，而且它的临床效果确切，副作用较大，可见，此药物的含量测定是评定药品的指标之一。设计对乙酰氨基酚的含量测定方法时，应当根据药品的理化性质、剂型、处方等多方面综合考虑。根据《中国药典》2020版二部，本方案为测定准确的对乙酰氨基酚的含量，建立了高效液相色谱法。 方案主要是借鉴了《中国药典》2020年版二部和四部通则中高效液相色谱法测定。根据现行版中国药典规定，对乙酰氨基酚的含量测定包括：系统适用性试验、色谱条件的确定和测定方法。 色谱条件是用Agilent C18 柱（4.6 mm×150 mm，5μm）为填充剂；以甲醇-水（20：80）（PH为3.0）作为流动相；柱温设置30℃；检测波长设置为244nm，流速设为1.0ml/min，理论板数按对乙酰氨基酚峰计算不得低于4000。 三、设计方案 （一）仪器与试药 　　1.仪器 高效液相色谱仪（厂家：美国，型号：Waters2695）； CQ超声波清洗器； UV2550 紫外-可见分光光度计； 玻璃棒、容量瓶、超声仪、移液管、洗耳球、烧杯、烧杯、胶头滴管、试剂瓶、 0.45μm微孔滤膜、电子天平、滤纸等。 2.试药 对乙酰氨基酚片（每片50mg）； 对乙酰氨基酚对照品（中检所提供）； 超纯水，甲醇（色谱纯），磷酸-三乙胺（色谱纯），乙腈（色谱纯）。 （二）色谱条件 1.色谱柱：Agilent Eclipse XDB-C18 柱（4.6 mm×150 mm，5μm） 2.流动相：甲醇-水（20：80）（含0.3%H3P04 PH=2.25） 3.检测波长：244nm 4.柱温：30℃ 5.进样量：20μl 6.流速：1.0ml/min （三）溶液的制备 1.阴性对照品溶液的制备 取阴性对照品（不含对乙酰氨基酚）适量，置电子天平上精密称定，然后置于研钵中研成细粉，精密称取细粉适量（约相当于对阴性对照品50mg），置100 ml容量瓶中，加流动相适量使其溶解完全，再稀释至刻度，摇匀、滤过，用移液管精密移取续滤液2ml，置50ml容量瓶中，加入流动相稀释至刻度，摇匀，再用0.45μm的微孔滤膜过滤，取续滤液作为阴性对照溶液。 2.供试品溶液的制备 取对乙酰氨基酚20片，去除外层糖衣膜，置电子天平上精密称定，然后置研钵中充分研细，精密称取细粉适量（约相当于对乙酰氨基酚0.8g），置于50ml的容量瓶中，加甲醇使溶解，再加水至定容至刻度，摇匀，用0.45μm滤膜滤过，精密移取续滤溶液2mL，置于10mL容量瓶中，再加60%甲醇稀释至刻度，摇匀，取续滤液作为供试品溶液。 3.对照品溶液的制备 称取对照品10mg，精密称定，置100mL容量瓶中，再加入60%的甲醇溶液稀释至每1mL中约含0.80mg的对照品的溶液，过滤，静止后取续滤液作为对照品溶液。 （四）方法学考察 1.专属性试验 精密吸取“供试品溶液的制备”项下的对乙酰氨基酚供试品溶液和“对照品溶液的制备”项下的对照品溶液各20μl，分别注入高效液相色谱仪中，按“色谱条件”项下的条件测定，如果在供试品的色谱图中对乙酰氨基酚的色谱峰与其相邻峰分离较好（分离度不低于2.0），则说明结果显示无干扰，而且此方法的专属性较好。 2.线性关系考察 精密吸取对照品溶液约35mg，加水至刻度，然后充分摇匀。再精密量取该溶液1.0、1.5、2.0、2.5、3.0ml,分别置于5个10ml的容量瓶中，加入流动相稀释定容至刻度，摇匀，每个容量瓶中的溶液各取20μL，按“色谱条件”项下条件分别注入液相色谱仪中进行测定，同时记录各溶液色谱峰峰