药剂学实验：脂质体的制备及包封率的测定.ppt

脂质体的制备及检测;目的要求;实验原理; 脂质体系一种人工细胞膜，它具有洋葱似的封闭球形结构，可使药物被保护在它的结构中，发挥定向作用，特别适于作为抗痼药物载体，以改善药物的治疗作用，降低毒副作用等。 脂质体系由磷脂为骨架膜材及附加剂组成。用于制备脂质体的磷脂有天然磷脂，如豆磷脂，卵磷脂等，合成磷脂，如二棕榈酰磷脂酰胆碱，二硬脂酰磷脂酰胆碱等。磷脂在水中能形成脂质体是由其结构决定的。磷脂具有两条较长的疏水烃链和一个亲水基团。当较多的磷脂加至水或水性溶液中，磷脂分子定向排列，其亲水基团面向两侧的水相，疏水的烃链彼此对向缔合形成双分子层，形成椭圆形或球状结构一—脂质体。常用的附加剂为胆固醇，它也是两亲性物质，与磷脂混合使用，可制备稳定的脂质体，其作用是调节双分子层流动性，减低脂质体膜的通透性。其它附加剂有十八胺、磷脂酸等，这两种附加剂可改变脂质体表面电荷的性质。; 脂质体可分为三类： 小单室(层)脂质体：粒径在20～50nm，凡经超声波处理的 脂质体混悬液，绝大部分为小单室脂质体； 大单室脂质体：粒径约为200～1000nm，用乙醚注入法制备 的脂质体多属这一类。 多室(层)脂质体：粒径约在400～3500nm； 脂质体包封(裹)率的测定 ： 包封率％＝（C总-C游离） /C总 × 100 ％ 式中C总------脂质体混悬液中的药物浓度 C游离------未包入脂质体中的药物浓度 影响脂质体包封率的因素有多种，如磷脂质的种类，组 成比例，制备方法及介质的离子强度等。 ;包封率的测定方法： 凝胶过滤法：常用凝胶为Sephadex G50、 G100或Sephrouse4B、6B。 超速离心法 透析法 超滤膜过滤法 ; 脂质体的制法有多种，可按药物性质或需要进行选择。 薄膜分散法：是一种经典的制备方法，它可形成多室脂质体，经超声 处理，得到小单室脂质体。特点是操作简便，但包封率 较低。 注入法：根据所用溶解磷脂质的溶剂，可分为乙醚注入法和乙醇注入 法。乙醚注入法是将磷脂、胆固醇和脂溶性药物及抗氧剂等 溶于适量的乙醚中，在搅拌下慢慢滴入50～60℃水性溶液 中，蒸去乙醚，即可形成脂质体。此法适于实验室小量制备 脂质体。本实验采用此法制成脂质体，安定为模型药物。乙 醇注入法制备脂质体，脂质体混悬液一般可保留10％～20％ 乙醇。最近还有人研究用Freon为溶剂溶解磷脂质等脂溶性成 分，采用注入法制备脂质体。此法适于不耐热的药物。 反相蒸发法：是制备多层脂质体或大单室脂质体的方法，此法包封率 高。 冷冻干燥法：适于在水中不稳定的药物制备脂质体。 熔融法：适于制备多相脂质体，制得的脂质体稳定，可加热灭菌。;试剂与器材; 实验步骤;2.操作 (1)磷脂、胆固醇乙醇溶液的配制：取处方量的卵磷脂、胆固醇溶于15～20ml的乙醇中，即得。 (2)水杨酸脂质体的制备：取生理盐水约30ml于50ml烧杯中，置磁力搅拌器上，加热至50～60℃，将含卵磷脂、胆固醇的乙醇液滴加于生理盐水中后继续搅拌约10min.，使乙醇完全蒸发除去，加入水杨酸，再继续搅拌2h，加生理盐水至50ml，取下磁力搅拌器，镜检，即得。;3.质量检查与评定 (1)脂质体的形态与粒度：显微镜（油镜） (2)异物：显微镜下观察有无异物。 (3)包封率的测定（超滤膜过滤法）：取3～5ml水杨酸脂质体混悬液置超滤器上，加压过滤，收集滤液。取0.1ml滤液置25ml容量瓶内，加0.5%硫酸的甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，在248nm波长处测定吸光度，计算未包入脂质体中安定的浓度。 包封率％＝（C总-C游离） /C总× 100 ％;注意事项;思考题