《发育生物学》第3版课件004-转录和转录前调控.pptVIP

果蝇成灯刷状Y染色体结构 三、脊椎动物细胞核染色体DNA甲基化 在发育中，细胞核存在编程现象，即发育中细胞核全能性表达的程序性改变；当发育程序改变时，将会出现细胞核的重编程。 染色体DNA甲基化是脊椎动物细胞核编程的方式之一。哺乳动物发育过程中存在两个重要的细胞核的甲基化改变阶段，一是配子形成期，另一个是卵裂期。 在分化的体细胞中，可能由于染色质甲基化模式不同而使其基因表达图案受到限定。 通常假定不论基因处于活跃或不活跃状态时，都具完全相同的核苷酸序列。血红细胞前体中的?-珠蛋白基因应与同种动物成纤维细胞或视网膜细胞的?-珠蛋白基因具同样的核苷酸序列。然而，在启动子区的DNA上具微小的差异。1948年R. D. Hotchkiss在DNA中发现“第五种”碱基，即5-甲基胞嘧啶(5-methylcytosine)。 在真核生物中，此碱基是在DNA复制后由酶促合成的。 哺乳动物中约5%的胞嘧啶被转化为5-甲基胞嘧啶。这种转化只在胞嘧啶残基后具一鸟嘌呤 （CpG)时才发生。 近来证实一个基因的胞嘧啶的甲基化程度也控制着基因的转录，即DNA甲基化可能改变基因的结构，也调节它的活性。 已证实在三个方面DNA甲基化导致差异性基因活性。 (1)启动子的甲基化导致编码组织特异性蛋白基因的时空调节。这主要见于脊椎动物中。 （2）DNA甲基化与区别哺乳动物中一些卵子来源和精子来源的基因有关，从而使早期发育中仅其中一个表达(基因印迹)。 （3）DNA甲基化与每一雌性细胞中两个X染色体中一个基因的持续抑制有关。 （一）、启动子甲基化与基因活性的相关性 正在发育的人及鸡红血细胞中 合成珠蛋白 DNA完全没有甲基化 不合成珠蛋白的细胞中 不合成珠蛋白 DNA完全甲基化 鸡输卵管细胞 鸡卵白蛋白基因没有甲基化 合成鸡卵百蛋白 别的鸡细胞 鸡卵白蛋白基因甲基化 不合成鸡卵百蛋白 器官特异性甲基化 不同程度甲基化的珠蛋白基因引入细胞 完全甲基化的珠蛋白基因 转基因 体外培养细胞 不被转录 完全未甲基化的珠蛋白基因 转基因 体外培养细胞 被转录 通常启动子区的甲基化抑制转录。 （二）、甲基化与转录形式的维持 ?甲基化的不同可能与在几个细胞世代中保持一种转录形式有关。在复制时，每一DNA链作为其互补链的模板。在甲基化区，甲基通常在双螺旋的两条链上。因为一条上的CG在另一链上的影像为GC。 在复制期，一条DNA链（模板链）上具甲基化时，新合成的链上则无甲基化。然而，DNA甲基转移酶对甲基化链上的DNA具有很大的倾向性。当见到一条DNA链上的甲基化CpG时，便甲基化另一链上新的胞嘧啶 DNA的甲基化具有可复制性 由于甲基化型式是在每一细胞分裂后遗传来的，一些因素必须有能力识别分化细胞中的甲基化状态的基因。在以后使它们脱甲基化。 甲基化的?-肌动蛋白 基因转染 成肌细胞 正常时转录?-肌动蛋白 被脱甲基化 ?-肌动蛋白转录 甲基化的?-肌动蛋白 基因转染 其它细胞 正常时不转录?-肌动蛋白 保持甲基化 ?-肌动蛋白不转录 甲基化怎样抑制转录呢？ 一种可能为：如果DNA被甲基化后，转录因子找不到它们的增强子或启动子序列。 另一种可能为：一些因子可能特异地识别甲基化的DNA，并与转录因子竞争这些位点。 已证实一甲基化CpG结合蛋白(methyl-CpG-binding protein)结合到甲基化的启动子序列，此蛋白似乎与转录因子的结合相竞争，从而减少这些位点的转录。 （三）、甲基化与基因印迹 基因印迹: 指某一个基因是否在胚胎中表达，取决于其来自于父亲或母亲。雄核和雌核在发育中的作用不完全相同，都是胚胎正常发育所必需的。 哺乳动物精子和卵子的基因组是不同的。如果合子核来自两个卵原核或两个精原核时，合子不能适当地发育。这些发育缺陷可能是某些基因只有来自精子和卵子时才处于活性状态。 IGF-2 父本 表达 母本 不表达 H19 父本 不表达 母本 第七条染色体上 印记（与特定甲基化模式无关） 甲基化 印记 H19表达 未甲基化 产生一个不翻译的RNA 该RNA的唯一功能就是抑制IGF2的转录 小鼠中亲代印记控制基因表达（1） 小鼠中亲代印记控制基因表达（2） IGF2R 父本 第十七条染色体上 启动子上甲基化位点被甲基化 印记 产生一个反义才IGF2R 的RNA 内含子上甲基化位点未被甲基化 父本IGF2R不表达 从转录或转录后水平抑制IGF2Rb 表达 母本 启动子上甲基化位点未被甲基化 不能产生一个反义才IGF2R 的RNA 内含子上甲基化位点被甲基化 母本IGF2R表达 现在认为大多数哺乳动物雄性及雌性原核的差异涉及到其甲基化型式的差异。 甲基化与非甲基化CG二聚体的分布可用限制性内切酶HpaII及 MspI来分析。