梅毒患者外周血PD1的表达水平及临床价值研究.docVIP

梅毒患者外周血PD1的表达水平及临床价值研究 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：梅毒患者外周血PD1的表达水平及临床价值研究 1 1、资料与方法 2 2、结果 4 3、讨论 5 文2：HCV感染者外周血T细胞PD1的表达水平研究 7 1 材料与方法 8 2 结 果 9 3 讨论 10 参考文摘引言： 11 原创性声明（模板） 13 文章致谢（模板） 13 正文 梅毒患者外周血PD1的表达水平及临床价值研究 文1：梅毒患者外周血PD1的表达水平及临床价值研究 梅毒系苍白密螺旋体苍白亚种引起的性传播性疾病，临床表现多样，虽病程发展相对较慢，但可导致皮肤黏膜、心血管、神经、骨骼等多系统病变，不仅损害患者自身身心健康，而且危及下一代健康[1]。相关流行病学报道，我国梅毒发病率自2000年的/10万，年均增长率达%，已成为重要的公共卫生问题[2]。程序性死亡分子1(PD-1）属CD28超家族成员，主要表达于活化的T淋巴细胞、B淋巴细胞表面，PD-1及其配体PD-L1或PD-L2相互作用，如与PD-L1结合后通过受体分子胞质尾部的酪氨酸激酶抑制基序激发抑制信号，从而介导负性调控[3，4]。但当前PD-1的临床研究多侧重于肿瘤疾病，甚至有以PD-1/PD-L1为治疗靶点的抗肿瘤药物，并取得一定治疗效果[5]。本研究以本院收治的60例梅毒患者为研究对象，对其外周血PD-1水平及临床意义进行分析，旨在为梅毒的临床诊治提供参考依据。 1、资料与方法 一般资料 选择2018年6月至2019年6月在本院就诊的60例梅毒患者为研究对象（梅毒组）。纳入标准：（1）符合《中华人民共和国卫生行业标准WS273-2007》梅毒诊断要求；（2）患者知晓研究内容并签署研究知情同意书。排除标准：（1）合并梅毒以外的其他内外科疾病、感染性疾病、自身免疫性疾病；（2）既往使用抗菌药物、激素或免疫调节剂；（3）梅毒病程60岁13例；梅毒快速血浆反应试验（RPR）滴度1∶113例，1∶215例，1∶421例，1∶811例；临床分期Ⅰ期19例，Ⅱ期41例。另选取本院同期30例体检健康志愿者作为对照组，其中男15例，女15例；年龄25～64岁，平均（±）岁。2组研究对象性别、年龄比较，差异无统计学意义（P），具有可比性。 方法 PD-1酶联免疫吸附试验（ELISA）试剂盒购自上海瓦兰生物科技有限公司；酶标分析仪为RaytoRT-2100C型，流式细胞仪为CY-TOMICSFC500型，均购自美国BeckmanCoulter公司；PE鼠抗人PD-1单克隆抗体购自美国BD公司；RPMI1640培养液购自美国Gibco公司；佛波酯、离子酶素购自美国Sigma公司。 -1水平检测 采集研究对象晨间空腹静脉血标本，乙二胺四乙酸抗凝，3000min、4℃条件下离心10min分离血浆，ELISA检测外周血血浆中可溶性PD-1水平。 采用流式细胞术检测外周血CD4+CD25+hight调节性T细胞（Treg）、CD4+CD25+lowTreg、CD4+CD25+lowTreg/CD4+CD25+hightTreg及其细胞上的PD-1水平。使用淋巴细胞分离液分离外周血单核细胞（PBMC)，10%胎牛血清的RP MI1640培养液重悬调整细胞水平至（～）×107/mL，RPMI1640培养液1∶1体积稀释肝素钠抗凝的全血标本，滴加佛波酯、离子酶素充分混匀，终水平分别为10μg/L、1mg/L，37℃、5%CO2细胞培养箱培养4h，用于PD-1分子检测。另取刺激后的肝素钠抗凝全血标本50μL，分别滴加FITC-CD4/APC-CD25+、PE鼠抗人PD-1单克隆抗体，充分混匀后4℃下避光孵育30min，加%NH4Cl溶血剂混匀，室温静置5～10min至溶血完全，1500min条件下离心5min，弃上清液，PBS洗涤，300μLPBS液重悬，FACSCanto检测，CYTOMICSFC500型流式细胞仪及配套分析数据，以CD4+T淋巴细胞设门读数。 观察指标 （1）比较梅毒组、对照组外周血PD-1水平；（2）比较不同性别、年龄、RPR滴度、临床分期的梅毒患者外周血PD-1水平；（3）分析梅毒患者外周血PD-1与临床特征的相关性。 统计学处理 采用统计学软件进行数据分析，计量资料符合正态分布以表示，采用t检验或方差分析；梅毒患者外周血PD-1与临床特征的相关性采用Spearman相关性分析，以P为差异统计学意义。 2、结果 组外周血PD-1水平比较 梅毒组外周血PD-1水平显著高于对照组[（±)pg/mLvs.(±)pg/mL]，差异有统计学意义（t=-，P=） 不同临床特征的梅毒患者外周