星形细胞瘤中钠氢交换体1的表达及其与恶性程度的关系研究.docVIP

星形细胞瘤中钠氢交换体1的表达及其与恶性程度的关系研究 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：星形细胞瘤中钠氢交换体1的表达及其与恶性程度的关系研究 1 1、材料和方法 2 2、结果 3 3、讨论 4 文2：胶质瘤GFAPS100Vimentin的表达及其与肿瘤恶性程度关系的研究 6 1 材料与方法 7 2 结果 8 3 讨论 9 参考文摘引言： 11 原创性声明（模板） 12 文章致谢（模板） 12 正文 星形细胞瘤中钠氢交换体1的表达及其与恶性程度的关系研究 文1：星形细胞瘤中钠氢交换体1的表达及其与恶性程度的关系研究 星形细胞瘤是胶质瘤的一种，在颅腔内呈弥漫性生长，恶性程度高，复发率和死亡率居高不下。尽管目前采取最大限度的手术切除肿瘤组织以及术后放疗和化疗技术的不断提高，但是恶性星形细胞瘤患者的预后仍不容乐观，其中胶质母细胞瘤的中位生存期为14～15个月[1，2]。钠氢交换体1(Na+/H+exchanger1，NHE1）存在于真核细胞中，是调节细胞内pH的重要跨膜转运蛋白[3]。NHE1以细胞内1个H+，细胞外1个Na+进行等分子比例的跨膜交换，从而排出胞内H+[4]。研究表明，实体肿瘤细胞有碱性的细胞内pH值和酸性的细胞外pH值，细胞内的pH值明显高于细胞间隙，这种细胞外液的酸性微环境对肿瘤细胞的增殖、生长以及浸润转移有重要的意义，而NHE1在形成和维持这种酸性微环境过程中具有重要意义[5]。然而，有关NHE1在人星形细胞瘤中的表达鲜有报道。为此，本研究应用免疫组织化学和免疫印迹对NHE1在人星形细胞瘤中的表达变化做了初步分析，探讨NHE1在星形细胞瘤增殖、生长中的作用。 1、材料和方法 标本的采集 所有星形细胞瘤标本及正常脑组织均取自重庆医科大学附属第一医院神经外科及第三军医大学附属大坪医院神经外科星形细胞瘤的患者，星形细胞瘤共计51例，正常脑组织27例。所有标本自术中取出后，一部分用于病理检查，另一部分则置于液氮中迅速冷冻，-80℃保存。经病史询问，证实所有患者术前均未接受过免疫治疗、放疗和化疗等治疗手段。 主要试剂 小鼠抗人NHE1单克隆抗体购自Abcam公司，小鼠抗人GAPDH单克隆抗体购自SantaCruz公司；免疫组织化学二抗试剂盒及DAB显色试剂盒均购自中杉金桥公司。 免疫组织化学显色 将所取瘤周脑组织与各级别星形细胞瘤的组织经4%多聚甲醛固定后，石蜡包埋，连续切片，厚度为5μm。常规脱蜡后行H-E染色，进行诊断和病理分级；选片进行两步法免疫组织化学显色，NHE1一抗浓度1∶200，DAB显色后用/LPBS终止显色，苏木精复染细胞核，梯度乙醇脱水、二甲苯透明后封片，显微镜观察并照相。阴性对照用/L的PBS代替一抗，其余步骤不变。采用北航（CM-2000B）生物医学图像分析系统进行图像分析，测定免疫反应阳性细胞的积分光密度值（IOD） 免疫印迹检测NHE1表达量 细胞裂解液（碧云天）提取瘤周组织和各级星形细胞瘤组织样品总蛋白，SDS凝胶分离蛋白，通过湿转方式将蛋白转至硝酸纤维膜上，用免疫印迹封闭液于37℃恒温水浴箱封闭，加入NHE1(1∶200）一抗、GAPDH(1∶500）一抗，4℃冰箱过夜孵育，PBST洗膜后分别加入相应二抗，37℃恒温水浴箱孵育2h，PBST洗膜后DAB试剂盒显色。用QuantityOne软件转换后测定灰度值，以GAPDH为内参对照，将NHE1条带灰度值分别与其内参GAPDH灰度值的比值作为观察指标，进行统计学分析。 统计学处理 所有数据采用统计软件进行处理，计量资料以±s表示，多组均数比较采用方差分析，其两两比较采用LSD法，以P为差异有统计学意义。 2、结果 病理诊断及免疫组织化学显色 根据世界卫生组织WHO2007对星形细胞瘤的病理分级标准，结果显示：低级别（WHOⅠ-Ⅱ）星形细胞瘤组织22例，高级别（WHOⅢ-Ⅳ）星形细胞瘤组织29例（图1） 图1星形细胞瘤病理分级（A1～C1）和NHE1在对照组及各肿瘤组织中的表达 阳性表达细胞的积分光密度值 对照组中NHE1主要分布在神经元和少量星形细胞胞膜上。在低级别星形细胞瘤组织中，NHE1分布在瘤细胞的胞膜上。在高级别星形细胞瘤组织中NHE1强烈表达在胞质和胞膜上（图1）。图像分析结果显示，对照组积分光密度值为±，低级别肿瘤星形细胞瘤组为±，高级别星形细胞瘤组为±。与对照组相比较，肿瘤组织中NHE1表达增强（P），与低级别星形细胞瘤比较，高级别星形细胞瘤组织中NHE1表达更强烈，差异有统计学意义（P） 表达 免疫印迹结果显示，对照组及肿瘤组织中均可见NHE1条带，肿瘤组织中MHE1表达增高，与对照组相比较，差异有统计学意义（