第九章配子与胚胎生物工程GnRH在动物生殖中的应用.pptVIP

场所、器械和人员的准备 供体羊的术前准备：术前1日停止喂食但不停水；术部剃毛；麻醉现多用速眠新全麻；术部皮肤先用2%-4%的碘酒消毒，晾干后再用70%-75%的酒精棉涂擦脱碘。将创巾固定在术部周围并露出术部。 2.1 术前准备 第九十五页，共一百三十六页。 2.2 手术过程 皮肤用外科刀一次切开，4-6厘米。肌肉用钝性分离的方法沿肌纤维的走向分层切开，最后切开腹膜。注意及时止血。 手术者将食指及中指由切口伸入腹腔触摸子宫角，用二指夹持，因势利导地牵引至创口表面，先循一侧的子宫角至该侧的输卵管，在输卵管的末端弯转处找到该侧的卵巢，观察卵巢表面的排卵点和卵泡发育情况并做记录。 第九十六页，共一百三十六页。 2.3 冲洗输卵管法 适宜于2--3日龄的胚胎。 将一根长5-7cm，外径3-4mm的硅胶管插入输卵管喇叭口内1-1.5cm，用血管夹或手固定。以左手母指和食指捏住子宫角前端，右手持吸有冲卵液的针管并将针头插入子宫角尖端，注入冲卵液约10-15ml。 第九十七页，共一百三十六页。 输卵管回收胚胎示意图 第九十八页，共一百三十六页。 供体的冲胚 第九十九页，共一百三十六页。 2.4 冲洗子宫法 适宜于5-7日龄胚胎。 子宫角回收胚胎示意图(1) 第一百页，共一百三十六页。 子宫角回收胚胎示意图(2) 第一百零一页，共一百三十六页。 用作受体的母畜应具有明显的发情症状，发情时间应与供体母畜一致。 羊采用手术法移植。 受、供体同时做好术前准备，在进行胚胎检查的同时或之后，立即在受体母畜腹部做一切口，轻轻拉出子宫角，找到排卵侧的卵巢并观察黄体数量与发育情况。 3. 胚胎的移植 第一百零二页，共一百三十六页。 只有黄体发育良好的受体才能用于胚胎移植，黄体过小、发育异常或退化的受体都不能用于胚胎移植，否则很难受孕。 卵巢上有1个黄体的受体一般只给移1枚胚胎，有2个或2个以上黄体者可以移2枚胚胎。 第一百零三页，共一百三十六页。 根据胚胎的发育阶段以及回收与移植部位一致的原则，用移植管将胚胎注入黄体同侧子宫角前端或通过喇叭口送至输卵管壶腹部（如图），然后迅速复位、缝合。 注意：保护受体卵巢黄体。 第一百零四页，共一百三十六页。 山羊手术法移胚A.子宫移胚器 B.子宫角移胚 C.输卵管移胚1.移植针 2.硅胶管 3.吸有胚胎的细管 第一百零五页，共一百三十六页。 麻醉、固定 第一百零六页，共一百三十六页。 刮 毛 第一百零七页，共一百三十六页。 3.受体的同期发情 3.1 定义 利用某些外源激素人为控制并调整一群母畜发情周期的过程,使之在预定的时间内集中发情,以便有计划地合理组织胚胎移植所进行的同期化处理方法,也称同步发情。 第六十三页，共一百三十六页。 缩短黄体期的前列腺素法(PG法) 延长黄体期的孕酮法 3.2 同期发情方法 第六十四页，共一百三十六页。 PGF2α有溶解黄体的作用，从而引起发情，所以只对卵巢上存在黄体的受体有效。 在情期第9天以后，注射PGF2α，常可在注射后2-3天内发情(WHY?)。 对于不能确定发情周期的受体，可采用间隔10-12天的两次注射法。 此方法方便可靠，但费用较高。 为何要进行两次注射？ 3.2.1 前列腺素处理法 第六十五页，共一百三十六页。 s 母牛发情周期 第7-17天，对前列腺素（PG）有反应 第六十六页，共一百三十六页。 第六十七页，共一百三十六页。 孕酮能够抑制腺垂体释放FSH，每日肌注或口服孕酮，或经阴道海绵栓给予孕酮或其类似物，一般处理12-18天后，可以抑制卵泡发育。停止处理或撤除海绵栓后，孕酮的抑制作用消失，卵巢上即有卵泡发育，通常在2-3天内发情。 为了提高排卵的效率，在孕激素处理结束的前一天，可以给予小剂量的FSH。 此法费用低，但处理时间长。 3.2.2 孕激素处理法 第六十八页，共一百三十六页。 第六十九页，共一百三十六页。 4.1 冲胚液和保存液的制作 冲胚液有很多种，目前最常用的为含5%犊牛血清的杜氏磷酸盐缓冲液（D-PBS），也可用于体外短期保存胚胎。 保存时间长或体外培养多用M-199液。 4.胚胎的收集 第七十页，共一百三十六页。 4.2 回收过程 牛适宜于5-7日龄胚胎; 现均采用二通管非手术采卵法：用直肠把握子宫颈法插入带有探针的二通管直至一侧子宫角的基部，通过打气孔注入8--10ml空气,抽出探针，通过中心管道反复注入--回收冲卵液,连续5--6次。同样方法冲另一侧子宫角。 第七十一页，共一百三十六页。 第七十二页，共一百三十六页。 PBS 集卵杯 子宫颈 子宫角 卵巢 第七十三页，共一百三十六页。 牛的非手术法回收胚胎 a.冲卵液 b.硬膜外麻醉