高三生物一轮复习学案：血红蛋白的提取与分离.docxVIP

第 PAGE 4 页 共 NUMPAGES 4 页 专题5 课题3 血红蛋白的提取和分离（一） 1．基础知识：蛋白质的物化理性质：形状、 、电荷性质和多少、溶解度、吸附性质、亲和力等千差万别，由此提取和分离各种蛋白质。 1．1凝胶色谱法：也称做 ，是根据 的大小分离蛋白质的有效方法。 （1）原理：分子量大的分子通过多孔凝胶颗粒的 ，路程 ，移动速度 ；分子量小的分子穿过多孔凝胶颗粒 ，路程 ，移动速度 。 （2）凝胶材料：多孔性， 类化合物，如葡聚糖、琼脂糖。 （3）分离过程：混合物上柱→洗脱→大分子流动快、小分子流动慢→收集大分子→收集小分子 ＊洗脱：从色谱柱上端不断注入 ，促使蛋白质分子的差速流动。 1．2缓冲溶液 （1）原理：由弱酸和相应的强碱弱酸盐组成（如H2CO3－NaHCO3，NaH2PO4/Na2HPO4等），调节酸和盐的用量，可配制不同pH的缓冲液。 （2）缓冲液作用：在一定范围内，抵制外界酸、碱对溶液pH的影响，而 。 1．3电泳：指带电粒子在电场的作用下发生 的过程。 （1）原理：不同蛋白质的 、 、 不同，在电场中受到的作用力大小、方向、阻力不同，导致不同蛋白质在电场中的运动方向和运动速度不同。 （2）分离方法：琼脂糖凝胶电泳、 等。 （3）分离过程：在一定pH下，使蛋白质基团带上正电或负电；加入带负电荷多的SDS，形成“蛋白质－SDS复合物”，使蛋白质迁移速率仅取决于 。 2．实验设计 2.1蛋白质的提取和分离一般分为哪些基本步骤？ 、 、 、 。 思考：是否所有种类的蛋白质的提取和分离都是这样的？为什么？ 。因为蛋白质的来源和性质 ，分离方法 。 2.2选择实验材料 （1）你认为鸟类血液和哺乳动物血液中，最好哪种血液来提取血红蛋白？为什么？ 动物血液。因为该细胞中 细胞核，血红蛋白含量高。 （2）血液由 和 两部分组成。血细胞中 细胞数量最多，细胞的含量最高的化合物是 , 该化合物是由 和 构成的，其中每个亚基中都含有一个能与O2和CO2结合的 基团。（3）从红细胞中分离出血红蛋白的过程为：洗涤红细胞、释放血红蛋白、分离血红蛋白、透析。 2.3样品处理: ①红细胞的洗涤：目的： (如血浆蛋白)，获得纯净红细胞。 过程：血样 短时间离心→吸出上层透明 色血浆(含血浆蛋白)，将下层暗红色的红细胞液体倒入烧杯→加入 倍体积的 →再低速短时间离心→重复三次，直至上清液不再呈现 色→得到纯净红细胞。 注：为防止 ，在采血容器中要预先加入抗凝血剂柠檬酸钠。 生理盐水作用：能保持红细胞 稳定而不至于破裂。 洗涤次数过 ，无法除去血浆蛋白； 离心速度过高和时间过长会使 。 ②血红蛋白的释放：目的：使红细胞 ，释放血红蛋白。 过程：红细胞加 到原血液的体积→加 40%体积的 →搅拌→红细胞 ，释放血红蛋白 注：蒸馏水作用： 。 甲苯作用： 。 ③分离血红蛋白溶液：目的：经过离心使血红蛋白与 分离开。 过程：混合液离心→用滤纸过滤，除去脂溶性沉淀层→分液漏斗中静置片刻→分离出下层的 。 试管中混合液离心后分为四层，从上往下数：第 1 层：无色透明的 层；第 2 层：白色薄层固体，是 物质的沉淀层；第 3 层：红色透明液体，是 的水溶液；第 4 层：暗红色的杂质沉淀层。 2.4粗分离——透析：①目的：除去样品中 。 ②原理：透析袋能使小分子 ，而将大分子 。 ③方法：将血红蛋白溶液装入透