果蔬中过氧化物酶活性的测定.pdfVIP

果蔬中过氧化物酶活性的测定 一、目的要求 了解过氧化物酶的作用，掌握愈创木酚法测定果蔬组织中过氧化物酶活性的 方法。 二、基本原理 过氧化物酶 （Peroxidase，POD）是果蔬体内普遍存在的一种重要的氧化还 原酶，它与果蔬的许多生理过程和生化代谢过程都有密切关系。在果蔬的生长发 测 育、成熟衰老过程、抗病、抗氧化、抗逆境胁迫中，POD 活性不断发生变化。 在受到外界刺激、病原菌侵染、贮藏环境变化、加工条件改变等作用时，果蔬组 织中POD 酶活性都会做出相应得应答反应。 检 过氧化物酶催化过氧化氢 （H O ）氧化酚类物质产生醌类化合物。这些化合 2 2 物进一步缩合或与其它分子缩合形成颜色较深的化合物。在过氧化物酶催化作用 质 下，过氧化氢能将愈创木酚 （邻甲氧基苯酚）氧化形成4-邻甲氧基苯酚。该产物 呈红棕色，在470nm 处有最大光吸收，故可通比色法测定过氧化物酶的活性。 三、材料、仪器及试剂 液 （一）材料 各种水果和蔬菜。 测 海 （二）仪器及用具 研钵、高速冷冻离心机、分光光度计、秒表、移液器、离心管、试管、容量 上瓶 （100mL，1000mL）。 检 （三）试剂 1．100mmol/L、pH 5.5醋酸缓冲液 质 母液A （200mmol/L 醋酸溶液）：量取11.55mL 冰醋酸，加蒸馏水稀释至1 000mL。 液 母液B （200mmol/L 醋酸钠溶液）：称取16.4 g 无水醋酸钠 （或称取27.2g 三水合乙酸钠），用蒸馏水溶解、定容至1000mL。 测 取68mL 母液A 和432mL 母液B 混合后，调节pH 至5.5，加蒸馏水稀释 海 至1000mL。 2．50mmol/L、pH 5.5醋酸缓冲液 检 上 3．提取缓冲液 （含1mMPEG、4%PVPP 和1%TritonX-100） 称取340 mg PEG 6000 （聚乙二醇6000）、4 g PVPP （聚乙烯吡咯烷酮， 质 Polyvinyl–polypyrrolidone），取 1mLTriton X-100，用 100mmol/L、pH 5.5醋酸 缓冲液溶解、稀释至100mL。 4．25mmol/L 愈创木酚溶液 液 取320 μL 愈创木酚，用50mmol/L、pH 5.5醋酸缓冲液稀释至100mL。 5．0.5mol/LH O 2 2 海 取 1.42 mL 30% H O 溶液 （30%H O 的摩尔浓度约为 17.6mol/L），用50 2 2