固态微生物混合型饲料添加剂产品稳定性影响因素研究.docxVIP

固态微生物混合型饲料添加剂产品稳定性影响因素研究 我国饲料工业经过多年的快速发展，逐步形成了饲料添加剂及配合饲料等系列产品，为发展现代养殖业提供了有力支撑。但随之而来的是抗生素的大量使用和由养殖业带来的日益严重的环境问题。根据农业农村部194号公告要求，自2020年1月1日起，将退出除中药外的所有促生长类药物饲料添加剂品种。2020 年，饲料行业、养殖业开始为禁抗、减抗、替抗做出调整和改变。与此同时，枯草芽孢杆菌等34 种微生物和13 种酶制剂可以应用到饲料和饲料添加剂等产品中[1]。枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）属于芽孢杆菌属，大小（宽度×长度）为（0.7～0.8）×（2.0～3.0）μm，属革兰氏阳性菌。多项研究表明，枯草芽孢杆菌在养殖行业中的作用非常明显。钟光等（2020）向肉鸡日粮中添加枯草芽孢杆菌，提高肉鸡的免疫力。冯英珍（2020）在仔猪日粮中添加枯草芽孢杆菌和杜仲叶提取物，腹泻率降低约40%～50%。蔡艳等（2018）在水产养殖中用枯草芽孢杆菌代替抗生素，改善了养殖的水质。这些研究均强调了枯草芽孢杆菌在畜禽、水产养殖中的重要作用。研究发现，水分、载体含量大小对活菌数的影响存在某种非线性影响。目前关于对微生物类混合型饲料添加剂产品在保质期内的稳定性的研究不多。基于以上研究情况，本试验以枯草芽孢杆菌活菌数为衡量指标，通过对产品的水分含量以及喷浆玉米皮、豆粕、黄芪、甘草等组分的分析，研究各因素对产品的影响情况，为固态微生物混合型饲料添加剂类产品在保质期内的产品稳定性研究提供参考依据。 1 材料与方法 1.1 载体 本试验以喷浆玉米皮、豆粕、黄芪、甘草、石粉为载体，按要求混合而成，各成分均符合《饲料原料目录》和《饲料添加剂品种目录》要求。原料经粉碎，过16目和24目标准筛，24目标准筛筛上物少于10%。 1.2 试验菌粉 试验所用的枯草芽孢杆菌，粉状，来源于山东蔚蓝生物科技有限公司，活菌数1 000×108?CFU/g。 1.3 基础组方与测定指标 1.3.1 试验材料及基础组方 试验所用的混合型饲料添加剂为枯草芽孢杆菌，以喷浆玉米皮、黄芪、豆粕、甘草等为载体，加入枯草芽孢杆菌混合而成，各成分的组方范围为：喷浆玉米皮21%～33%、豆粕12%～18%、黄芪5%～14%、甘草3%～12%、枯草芽孢杆菌4%。将载体按组方混合，用快速水分测定仪初测水分后，根据组方对水分的要求，适当调整水分到该组方的水分，将枯草芽孢杆菌加入，混合均匀，将试样用自封样品袋分装为8 袋，每袋250 g，模拟产品的包装及保存状态，放置72 h 后，开始检测枯草芽孢杆菌的活菌数。 1.3.2 测定指标 测定样品中枯草芽孢杆菌活菌数的含量。 1.3.2.1 菌落计数 采用涂布法[6]和平板倾注法[7]相结合的方法计数。 1.3.2.2 培养基 枯草芽孢杆菌测定所用的培养基为NA营养琼脂培养基，购自杭州百思生物技术有限公司。 2 试验设计与试验过程 2.1 试验设计 试验使用DPS数据处理系统15.10高级版中的均匀试验设计法，表1为产品稳定性影响因素均匀设计水平参数，4水平5因素16处理的均匀设计表U16(45)，如表2所示。 表1 产品稳定性影响因素均匀设计水平参数 将表1所列的数据填入表2中，并按上述1.3.1要求完成分装和测定，均匀试验结果如表3所示。 2.2 试验结果分析 试验数据用Excel 2007 进行初步整理后，采用SAS9.2软件建立二次响应曲面回归模型，考察因变量Y（活菌数）与自变量X1、X2、X3、X4、X5（水分、喷浆玉米皮、豆粕、黄芪、甘草含量）之间的关系。 2.2.1 回归模型建立 利用SAS9.2 软件进行二次响应曲面的回归模型建立，其基本思路是，假设响应量（因变量）与自变量（观测值）之间满足某种二次函数关系，而且每个因素（自变量）的测量观测值都测三个以上的不同值，则可以通过最小二乘估计法来拟合影响因素和响应值之间的函数关系。假定因变量Y在五个自变量X1、X2、X3、X4、X5 的组合上被测量，则可得因变量Y 的二次响应模型的回归方程。 Y=β0+β1×X1+β2×X2+β3×X3+β4×X4+β5×X5+β 6×X11+β7×X21+β8X22+β9×X31+β10×X32+β11×X33+β12×X41+β13×X42+β14×X43+β15×X44+β16×X51+β17×X52+β18×X53+β19×X54+β20×X55 表2 产品稳定性影响因素均匀设计方案 表3 产品稳定性影响因素样品均匀试验结果 启动SAS9.20 软件，进入Editor 窗口，输入如图1所示各语句，用run运行后，得到SAS数据集。 它包含6 个变量，其中Y 代表样品中的活菌数；X1 代表样品中水分的含量；X2 代表喷浆