乌龟输卵管内精子储存对TLR2_4通路基因表达的影响.pdfVIP

乌龟输卵管内精子储存对TLR2/4 通路基因表达的影响 摘 要 精子储存作为一种特殊的生殖策略广泛存在于不同动物种类中，即雄性与雌 性完成交配后，精子能够在雌性的输卵管中储存下来等待 卵子成熟后与其结合。 输卵管是一个活跃和动态 的器官 ，在储存精子的同时也会面临病原微生物的感染 。 输卵管先天免疫系统会攻击病原微生物以消除病原微生物带来的有 影响。然而 ， 精子对于输卵管 而言 同样是外来物质，很 明显有活力的精子若被先天免疫系统攻 击是不 利 于繁衍 的。Toll样受体是 先天免疫系统 的重要 组成部分，其重要成员 TLR2/4在抵抗外来物 感染方面具有重要作用。本研宄以雌性乌龟为研宄对象 ， 通过 比较相 同时期已交配雌龟与 未 交配雌龟以及不同 时期已交配雌龟输卵管 TLR2/4通路基因 差异 表达和 TLR2/4蛋白 的分布情况 ，以探宄精子储存对于 TLR2/4通路基因表达的影响。主要研宄内容和结果如下： 1. 乌龟输卵管的显微结构研究 本研宄应用 组织切片 、苏木精-伊 红 染 色 H（E 染色 ）和光学显微镜技术观察 乌龟输卵管不同部位的显微结构。乌龟输卵管主要分为 阴道部、子宫 部、峡 部、 蛋白分泌部和漏斗部。阴道部、子 宫 部和 峡 部的 H E 染色结果显示上皮 细胞层 、 分泌腺层和肌肉层是乌龟输卵管的主要 组成部分，上皮细胞层是 由纤毛细胞和分 泌 细胞构成，纤毛细胞的纤毛能够深入管腔 ，并且在子宫部的管腔 中有少量精子 存在。 2 . 乌龟输卵管 TLR2/4通路基因表达及 TLR2/4蛋白分布 本研宄通过 荧光 定量 P CR 技术检测相 同时期已交配雌龟与未交配雌龟以及 不同 时期已交配雌龟输卵管（阴道 、子宫和 峡部）TLR2/4通路基因的表达，并 且 通过免疫组化技术探宄TLR2/4蛋白在乌龟输卵管不同部位的表达分布 。结果 表明繁殖期已交配雌龟输卵管中 由TLR2/4介 导的通路基因TLR2 、TLR4 MyD88、 、 IRAK4 、TRAF6 、IRF3 和 IL 6 的 m R N A 表 显著低于未交配雌龟 ；在冬眠期已 交配雌龟输卵管中 7Xi?2 、TLR4 、IRAK4 、 和 汉 F 3 的 m R N A 表 显著低 I 于未交配雌龟; 在不同时期的比较中，冬眠期已交配雌龟输卵管中TLR2、TLR4、 IRAK4、 和 的 mRNA表 显著低于繁殖期已交配雌龟输卵管中的表 达。免疫组化结果表明输卵管上皮细胞层的分泌细胞膜 、纤毛细胞膜及纤毛和分 泌腺层的腺体细胞膜中存在TLR2/4蛋白；在繁殖期已交配雌龟输卵管TLR2/4 蛋白表 显著低于未交配雌龟输卵管TLR2/4蛋白的表 ；在冬眠期未交配雌龟 输卵管TLR2/4蛋白表 显著高于已交配雌龟输卵管TLR2/4蛋白的表 ；并且 冬眠期已交配雌龟TLR2/4蛋白的表 也显著低于繁殖期已交配雌龟的TLR2/4 蛋白的表达。由这些结果推测精子长期被储存在输卵管内并维持活力需要有一个 适宜的微环境 ，而输卵管免疫系统被抑制可能正是精子持续存活所需要的。 本研宄首次探讨了探宄精子储存对乌龟输卵管先天免疫系统的影响，为全面 揭示爬行动物精子储存机制提供理论基础 。 关键词 ：乌龟；输卵管 ；精子储存 ；TLR2/4 II 目录 第 一 章 文献 综述 1 1乌龟分类地位及生物学特性1 2 动物精子储存研宄进展 1 2.1昆虫 2 2.2鱼类 2 2.3两栖类 3 2.4爬行类 3 2.5鸟类