色氨酸转氨酶和色氨酸脱羧酶的提取和活性测定.pdfVIP

色氨酸转氨酶和色氨酸脱羧酶的提取和活性测定 植物体内色氨酸（Trp）合成吲哚乙酸（IAA），可以经过吲哚-3-丙酮酸（IpyA）和色胺（TNH2） 两种途径，具体反应如下： 1.仪器设备 低温高速离心机、分光光度计、搅拌机、恒温震荡水浴等。 2.操作方法 1）酶的提取：材料可用番茄茎、绿豆苗、菜豆根、大麦苗等。将植物材料切碎，于3℃下 冰冷30min，加两倍体积的100mmol/L 磷酸盐缓冲液 （含 10mmol/L EDTA，10mmol/L2-巯基 乙醇，10mmol/LL-色氨酸和0.1mmol/L 磷酸吡哆醛，pH8.0），在搅拌器中搅拌1min，用纱布 过滤，滤液用35000×g 离心20min。上清液小心倒入干净管中，再以35000 ×g 离心20min。第 二次离心的上清液，用2.5×30cm Sephadex G-25柱进行层析（预先用洗脱的磷酸盐缓冲液平衡过）， 层析的洗脱液为含有10mmol/L2-巯基乙醇和0.1mmol/L 磷酸吡哆醛的50mmol/L 磷酸盐缓冲液 （pH8.0）。收集液供测酶活用。以上操作均在3℃下进行。 2）酶活性的测定 （1）色氨酸脱羧酶的测定：以测定色胺形成量判别酶活性的大小。取5ml 上述酶提取液和 5ml 基质溶液 （0.1mm