色氨酸合成酶的提取和活性测定.pdfVIP

色氨酸合成酶的提取和活性测定 色氨酸合成酶在磷酸吡哆醛的存在下，可催化丝氨酸与吲哚生成色氨酸，而色氨酸则是植物 体内生物合成生长素 （IAA）的前体。其反应式如下： 1.仪器设备 研钵、分光光度计、低温高速离心机、一般离心机和纸层析设备等。 2.操作方法 1）酶的提取：材料可用豌豆苗、烟草愈伤组织等。豌豆苗或烟草愈伤组织经冰冻后，放置 在预冷过 （-15℃）的研钵中，加干净的石英砂和少量磷酸缓冲液 （pH7.0）在3℃下研磨，匀浆 用24000×g 离心30~60min （0℃），上清液供测酶活性。 2）酶活性的测定 （1）在 13mm×100mm 的试管中，加0.3ml 的60mmol/L dl-丝氨酸，0.04ml 的0.2mmol/L 吲哚，0.16ml 的80mmol/L 磷酸钾缓冲液 （pH8.5），0.1ml 含有10mg 的磷酸吡哆醛，0.4ml 酶提取液，再加重蒸馏水至最后体积为1.0ml，在30℃水浴中保温 100min。然后加0.2ml 的 5%NaOH 中止反应。对照管中不加丝氨酸或不加酶提取液。 （2）没有反应的吲哚残留物的测定可采用以下方法，即加3ml 甲苯于试管中，摇匀，低速 离心1min，溶液明显地分成两层，取1ml 甲苯层提取液于干净试管中，加