高中生物人教版高中选修生物技术实践专题DNA和蛋白质技术血红蛋白提取和分离.pptx

自贡市熊硕生物名师工作室 ZIGONGSHI XIONGSHUO SHENWU MINGSHI GONGZUOSHI 高中生物选修一 专题5课题3 血红蛋白的提取和分离（复习课） 自贡一中 章春容 一、基础知识回顾分离原理：根据蛋白质各种特性的差异如________________、_________________ 、______、_________________________ 等可以分离不同的蛋白质。2.分离方法：_________ (也叫_________ );_______。分子的形状和大小所带电荷的性质和多少溶解度吸附性质和对其他分子的亲和力分配色谱法凝胶色谱法电泳法 一、基础知识回顾（1）蛋白质的两种分离方法原理比较方法原理凝胶色谱法根据___________________分离蛋白质电泳法利用了各种分子_________的差异以及分子本身_________________，使带电分子产生不同的迁移速度进行分离相对分子质量的大小带电性质大小、形状的不同知识梳理 一、基础知识回顾（2）蛋白质分子在凝胶中的运动情况分析相对分子质量较大的蛋白质相对分子质量较小的蛋白质直径大小比凝胶颗粒空隙直径____ 比凝胶颗粒空隙直径___运动速度运动路程洗脱顺序大小较快较慢较长较短先从凝胶色谱柱中洗脱后从凝胶色谱柱中洗脱 一、基础知识回顾（3）电泳概念：带点粒子在_____的作用下带电分子会与其所带电荷____的方向移动的过程。 电场相反琼脂糖凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳常用的电泳方法是：__________________;______________________SDS为消除净电荷对迁移率的影响，可以在凝胶中加入_______ ，它能使蛋白质完全变性,也能掩盖蛋白质间电荷差别，故迁移速率只取决于分子的大小。3.缓冲溶液的作用： 为了能够在实验室条件下准确模拟生物体内的过程，保持体外溶液的pH与体内环境中的pH基本一致。 课堂检测A1．凝胶色谱法中移动速度快的是(　　) A．相对分子质量大的　　　 B．相对分子质量小的 C．溶解度高的 D．溶解度低的2．下列各项中，不是电泳使样品中各种分子分离的原因的是(　　) A．带电性质差异 B．分子的大小 C．分子的形状 D．分子的变性温度3.下列有关电泳的叙述，不正确的是(? ?) A．电泳是指带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程 B．待测样品中各种分子的形状、大小及带电性质的差异等会影响其 在电泳中的迁移速度 C．进行电泳时，带电粒子会向着与其所带电荷相同的电极移动 D．常用的电泳方法是琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳DC纯度鉴定 样品处理 纯 化 粗分离 二、实验操作蛋白质的提取和分离步骤样品采集目的：去除杂蛋白低速短时间离心方法：红细胞的洗涤生理盐水洗涤溶液：甲苯层（无色透明）血红蛋白的释放先蒸馏水再加40%体积甲苯脂溶性物质（白色）分离血红蛋白较高转速较长时间离心，分为四层血红蛋白溶液（红色透明）透析（20mmol/L PH=7的磷酸缓冲液）沉淀物（暗红色）凝胶色谱柱制作凝胶色谱法透析凝胶色谱柱的装填样品的加入和洗脱SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 课堂检测B4．在蛋白质的提取和分离中，关于对样品处理过程的分析，不正确的是（ ） A．洗涤红细胞用0.9%的生理盐水，目的是去除杂蛋白 B．洗涤红细胞和分离血红蛋白都要离心，离心速度可相同 C．血红蛋白的释放要加蒸馏水和甲苯 D．透析的目的是去除样品中相对分子质量较小的杂质5.将经处理破裂后的红细胞混合液以2000?r/min的速度离心10min后，离心管中的溶液分为四层，从上到下的顺序依次是( ) A．血红蛋白、甲苯层、脂溶性物质层、沉淀层 B．甲苯层、沉淀层、血红蛋白、脂溶性物质层 C．脂溶性物质层、血红蛋白、甲苯层、沉淀层 D．甲苯层、脂溶性物质层、血红蛋白、沉淀层D 6.右图为样品的加入与洗脱示意图，正确的操作次序是（ ）AD.③④①② C.④①②③ B.①②④③ A.③①④② 课堂检测7.已知某样品中存在甲、乙、丙、丁、戊五种物质，其分子大小、电荷的性质和数量情况如右图所示。下列叙述正确的是（ ） A.若五种物质为蛋白质，则用凝胶色谱柱分离时，甲的移动速度最快 B.将样品装入透析袋中透析12h，若分子乙保留在袋内，则分子甲也保留在袋内 C.将样品以2000r/min的速度离心10min，若分子戊存在于沉淀中，则分子丙也存在于沉淀中 D.若五种物质为蛋白质，用SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳分离样品中的蛋白质分子，则分子甲和分子丙形成的电泳带相距最近相对分子质量C丙丁乙戊甲电荷量0 课堂检测8.血红蛋白是人和其