仪器分析：色谱法.ppt

（2）固定相、流动相和离子对试剂 固定相：多为C18,C8反相键合相 流动相：以水为主的缓冲液，或水-甲醇、水-乙腈等混合溶剂 离子对试剂：四丁基铵正离子、十六烷基三甲基铵正离子，ClO4-，十二烷基磺酸根等 ? （3）应用 有机酸、有机碱特别是强酸 强碱的分析，如羧酸、磺酸、 胺类、酚类、药物、染料等 4. 离子色谱法 (1) 分离机理 试样中的离子与离子交换树脂上的离子发生反应： 阳离子交换：树脂—SO3-H++M+=树脂—SO3-M ++H + 阴离子交换：树脂—NR3+Cl-+X-=树脂—NR3+X -+Cl - 不同的离子与树脂离子的交换能力（亲和能力）不同，亲和力越大，离子越难洗脱，从而得以分离。 离子交换色谱与离子色谱的分离原理一样 离子色谱最大的改进是解决了微量组分的检测问题 双柱抑制型：在分离柱和检测器之间加一个化学抑制器，其作用有二，一是降低淋洗液的背景电导，二是增加被测离子的电导值，改善信噪比。灵敏度高。 单柱非抑制型：淋洗液直接进入电导检测器。简单、分辨率较好。 （2）固定相 离子交换剂，最常用的是乳胶薄壳型离子交换树脂小球，根据功能基可分为：强酸型（磺酸基团）、强碱型（季铵基）、弱酸型（羧酸）、弱碱型（伯、仲、叔胺） （3）流动相 双柱抑制型：分离阳离子，一般采用无机酸如HCl，HNO3等；分离阴离子，一般采用NaOH、NaHCO3/NaCO3。 单柱非抑制型：分离阳离子，用低浓度的HCl，HNO3等；分离阴离子，可用苯甲酸及其盐、酒石酸、柠檬酸等 ? （4）应用 分析无机阴离子的首选方法 还可用于分析无机阳离子，有机酸、碱，糖类、蛋白质等。 应用举例 5. 体积排阻色谱法（SEC） (1) 分离原理 以多孔凝胶为固定相，利用精确控制的凝胶孔径，使样品中不同分子大小的组分得以分离。 VR=V0+KD·Vp 0KD1.0 洗脱体积在V0 和V0 +Vp之间，峰容量有限，10-12个峰 用于分离分子大小差大于10%的样品 分离原理示意图 使用水溶液的凝胶过滤色谱法（GFC），主要用于分析多肽、蛋白质、核酸、多糖等。 使用有机溶剂的凝胶渗透色谱法(GPC)，主要用于高聚物（如聚乙烯、聚氯乙烯等）分子量的测定 （2）固定相 软质凝胶：如交联葡聚糖等，水相分离生化体系，适于低、中压操作 半刚性凝胶：较高交联度的苯乙烯、二乙烯苯共聚物，有机相洗脱，可承受10Mpa的压力 硬质凝胶 高交联度苯乙烯、二乙烯苯共聚物：凝胶渗透色谱法 多孔球形硅胶：凝胶过滤色谱法、凝胶渗透色谱法 羟基化聚醚多孔微球：凝胶过滤色谱法 ? （3）流动相 改善分离主要通过固定相来实现。流动相的选择原则是：溶解样品、与凝胶浸润、与检测器匹配、粘度小。如四氢呋喃；缓冲溶液 （4）应用 大分子的分离分析 聚合物分子量分布的测定 应用举例 1.聚乙二醇40000 2.聚乙二醇10000 3.聚乙二醇3000 4.聚乙二醇1000 5.聚乙二醇 6. 液相色谱分离类型及条件选择 选择合适的液相色谱分离类型 了解分析对象 要分析的组分的大致浓度 干扰物质 试样的性质 结构 分子量 酸碱性 溶解性 固定波长的紫外检测器 可变波长的紫外检测器 二极管阵列检测器 二极管阵列检测器之三维图 二极管阵列检测器之Isoabsorbance Plot 响应特性 选择性检测器，如芳烃类化合物的检测 灵敏度高，可检测10-9g/mL的物质 线性范围宽，104-105 对温度及流动相的改变不敏感 适合梯度洗提 HPLC常规检测器 应用举例 波长的选择 （2）示差折光检测器 结构 响应特性 通用性检测器 低灵敏度 基线易受温度的影响 不适合梯度洗提 (3) 荧光检测器 结构 响应特性 选择性检测器。如PAH，蛋白质 高灵敏度，比紫外高约1000倍 适合梯度洗提 应用举例 (4) 电导检测器 结构 响应特性 选择性检测器，对离子型化合物有响应 灵敏度高 受温度的影响 不能梯度洗提 （5）几种检测器特性比较 ? 示差折光 紫外 荧光 电导 应用范围 通用 选择性 高选择性 选择性 可否梯度淋洗 不可 可 可 不可 线性范围 104 105 103 104 最小检测量 μg ng pg ng 对温度敏感度 敏感 低 低 敏感 溶剂使用情况 无限制 受限制 受限制 受限制 四、HPLC主要类型及其选择 化学键合相色谱法 液固色谱法 离子对色谱法 离子色谱法 体积排阻色谱法 1. 化学键合相色谱法 （1）分离机理 正相键合相色谱法：固定相的极性大于流动相的极性，适用于分离油溶性或水溶性的极性或强极性化合物。 分配机理：分配系数 x