生物负荷和生物指示剂 宝录.pptxVIP

2019全国药品微生物检验控制技术培训上海宝录生物科技有限公司 生物负荷和生物指示剂两种建立和验证灭菌过程的方法? Overkill Method 过度杀灭法能够杀灭高浓度、高抗性的生物指示剂指示微生物。通常用于不受灭菌过程影响的金属、玻璃和其他物品。? Bioburden/Biological Indicator Method 生物负荷/生物指示剂方法适用于对灭菌条件敏感的产品依赖于BI和生物负荷微生物的相对抗性和数量的差异，其中生物负荷的抗性必须小于BI的抗性。 生物负荷? 待灭菌产品上的天然污染微生物称为生物负荷。? 生物负荷高度可变。? 微生物的类型? 微生物的数目? 微生物的抗性? 设备和制药厂商需要对灭菌前产品上发现的生物负荷进行描述和记录），还需要确定生物负荷数目和抗性的极限。（建立微生物菌库） D值测定相关法规【中国药典2015】：‘’在生物指示剂验证试验中，需确定孢子在实际灭菌条件下的D值，并测定孢子的纯度和数量。‘’【中国药典2020第二次修订意见稿】：灭菌用生物指示剂指导原则（新增）??用户应确定自制生物指示剂的纯度、芽胞数、D 值等参数，并制定有效期，以保证灭菌验证和监控的有效性。??用户应根据使用目的制定商品化生物指示剂的验收标准，以保证生物指示剂的性能符合相关要求。在生物指示剂验收前，可考虑对 D 值进行评估，必要时可进行 D值测定，确认 D 值和微生物数量的稳定性对于长期存放的生物指示剂尤为重要。 D值测定相关法规【中国药典2020第二次修订意见稿】：生物指示剂耐受性检查法指导原则（新增）D 值测定n 仪器??抗力仪（能够实现短时升温和降温的灭菌器），该设备适用于纸片式、自含式、芽胞悬液形式等的生物指示剂。??油浴仪（能够设定到 100℃以上的恒温设备），该设备适用于芽胞悬液生物指示剂。为保证测定结果的准确性，抗力仪的各项参数应满足 GB/T 24628 的要求。n 测定方法阴性分数法（LHSKP 法，也叫部分阴性法）残存曲线法，测定方法参见 GB18281.1（医疗保健产品灭菌生物指示物第 1部分：通则）。 生物负荷-D值测定相关法规【USP 1229.3 MONITORING OF BIOBURDEN】： D值测定测定仪器：生物指示剂耐热性评估仪（Biological Indicator Evaluator Resistometers，B.I.E.R.），能够运行方波循环的灭菌器，通常用于D值研究。 D值测定测定方法：SMC法LSKP法阴性分数法Fraction negativemethodD值测定残存曲线法Survivor curvemethod D值测定唯一问题 同样的液体，到达12.0F0的时间差16分钟 D值研究的意义? 在灭菌过程中评估产品对孢子的影响的试验? 需要知道产品和包装对生物负载和BI孢子产生什么影响，因为产品和包装可以影响微生物的抗性。? 比较产品/外包装生物负载中孢子与生物指示剂中孢子的抗性。? 如果与标准BI相比，该产品增加了BI孢子的抗性，则需要直接接种产品进行验证和常规监测。? 如果产品对BI孢子没有影响，则可以使用标准BI。 D值研究类型 美国药典的湿热方法学分类1229.1 STEAM STERILIZATION BY DIRECT CONTACT1229.2 MOIST HEAT STERILIZATION OF AQUEOUS LIQUIDS直接接触蒸汽灭菌液体湿热灭菌 D值研究的类型n液体制剂的D值研究液体载体通常是水基的，但实际配方和活性成分对孢子抗性具有显着影响。n固体载体部件的D值研究固体或液体载体的材料种类繁多。固体载体可以是纤维材质（纸，无纺高分子材料）或固体表面（不锈钢，玻璃，塑料或橡胶。）n生物负荷在产品中的Ｄ值研究 D值研究的意义液体载体??液体制剂可能对孢子抗性产生影响。? 有效成分（可以保护孢子，使灭菌更难）? 浓度? 防腐剂（可能会使产品更容易灭菌）? pH D值研究的类型——液体制剂的D值研究液体制剂的D值研究过程?将孢子接种到产品中（生物指示剂孢子或特殊孢子）。?还需要测试含有相同孢子的注射用水（WFI），以提供基线评估。?用存活曲线法确定D值。?测试装置通常由0.3ml的洋葱皮玻璃安瓿瓶组成。?将安剖瓶暴露于BIER容器中。?从产品中将孢子过滤洗脱。?对暴露后的指示剂进行孢子数测定，以直接测量孢子的对数减少值。 D值研究的类型——液体制剂的D值研究D值研究——为什么测试WFI？?大多数药品都是水性的。?与WFI相比，孢子在产品中更容易被杀死。?WFI D值提供基线或参考Water For InjectionProduct A 15mg/lactive ingredientProduct B 30mg/lactive ingre