DB32-T 3762.5-2020新型冠状病毒检测技术规范 第5部分：血清IgM和IgG抗体酶联免疫吸附检测程序.docxVIP

DB32/T 3762.5—2020 PAGE I 新型冠状病毒检测技术规范 第5部分：血清IgM和IgG抗体酶联免疫吸附检测程序 范围 本部分规定了新型冠状病毒者血清中IgM和IgG抗体酶联免疫吸附检测的环境与设施、设备与耗材、试剂与材料、血清样本采集、酶联免疫吸附实验操作。 本部分适用于新型冠状病毒感染确诊病例、疑似病例以及确诊病例的密切接触者血清学检查。 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 Doc9284-AN/905 危险品航空安全运输技术细则 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件 IgM和IgG抗体 IgM and IgG antibodies SARS-CoV-2感染人体后，除了对靶器官产生致病过程外，病毒基因组编码的结构蛋白、非结构蛋白还刺激机体免疫系统，产生特异性免疫应答，分泌病原体特异性IgM和IgG抗体至血液循环中。 环境与设施 在BSL-2级实验室内进行实验。 设备与耗材 设备：生物安全柜、洗板机、酶标仪（含有450nm波长滤光片）、高压锅、生物安全运输箱、水浴锅。 耗材：个人防护装备：N95及以上防护口罩、护目镜、一次性防护面罩、医用无纺布帽、连体防护服、一次性手术衣、乳胶手套、 防水靴套、真空釆血管、无菌螺旋口塑料管。 试剂与材料 新型冠状病毒人IgM抗体ELISA检测试剂盒、新型冠状病毒人IgG抗体ELISA检测试剂盒。 样本采集 用真空负压采血管采集血液样本5mL，室温静置30分钟，1500rpm～2000rpm离心10分钟，收集血清于无菌螺口塑料管中。 样本运输 同本标准 第1部分6.1和6.2。 酶联免疫吸附检测步骤 酶联免疫吸附实验-IgM (间接法) 根据样本数量取出一定量的预包被抗原的酶标板并平衡至室温，每次实验设阴、阳和空白复孔对照； 向板中加入100μL/管样本稀释液，然后向其中加入1μL的待测血清（根据需要添加阳性、阴性参考对照），将酶标板用封板膜封闭，置37℃孵箱中孵育30分钟； 取出酶标板置于洗板机上用洗液洗涤（或者用洗瓶手工洗涤）5次后，甩干孔内残留液或倒扣酶标反应板在吸水纸上拍去孔内残留液； 于各孔中加入HRP标记的抗人IgM工作液100μL/孔，置37℃孵箱中孵育30分钟； 重复8.1.3步骤； 将显色液A、B液按1:1混合后取混合显色液每孔加100μL，轻拍酶标反应板，混匀后置室温5分钟； 于各孔中加入终止液50μL/孔，轻拍混匀； 将酶标板置于酶标仪450nm波长下，测定各孔光吸收OD值； 根据检测试剂设计者的要求判断结果。 酶联免疫吸附实验-IgG (间接法) 根据样本数量取出一定量的预包被抗原的酶标板并平衡至室温，每次实验设阴、阳和空白复孔对照； 向板中加入100μL/管样本稀释液，然后向其中加入1μL的待测血清（根据需要添加阳性、阴性参考对照），亦可把血清在1:100稀释的基础上再进行倍比稀释。将酶标板用封板膜封闭，置37℃孵箱中孵育30分钟； 取出酶标板置于洗板机上用洗液洗涤（或者用洗瓶手工洗涤）5次后，甩干孔内残留液或倒扣酶标反应板在吸水纸上拍去孔内残留液； 于各孔中加入HRP标记的抗人IgG工作液100μL/孔，置37℃孵箱中孵育30分钟； 重复8.2.3步骤； 将显色液A、B液按1:1混合后取混合显色液每孔加100μL，轻拍酶标反应板，混匀后置室温5分钟； 于各孔中加入终止液50μL/孔，轻拍混匀； 将酶标板置于酶标仪450nm波长下，测定各孔光吸收OD值; 根据检测试剂设计者的要求判断结果。 _________________________________