植物细胞工程制药.ppt

（4）粒子介导DNA转移 基因枪法（gene gun）是依赖高速的金属微粒将外源基因导入活细胞的一种转化技术。 其基本原理是将外源DNA包被在微小的金粒或钨粒表面，然后在高压的作用下微粒被高速射入受体细胞或组织。微粒上的DNA进入细胞后整合到植物染色体上得到表达，从而实现基因转化。 是继农杆菌介导法之后的第二大基因转化法。 在禾本科作物上应用较广泛 第六十二页，共九十五页。 基因枪法转化的优点有： 无宿主限制：农杆菌介导法只对双子叶植物敏感，限制了它的应用范围。而基因枪没有物种限制。 靶受体类型广泛：可以是原生质体，叶片，悬浮细胞，茎或根切段，种子胚，愈伤组织，花粉等。 操作简单快速 但该方法转化率低，外源DNA整合机理不清楚。应该说该技术只处在研究阶段，尚未成熟。 第六十三页，共九十五页。 3.种质转化系统法 种质转化系统是以植物自身的生殖系统种质细胞为受体进行的转化，如花粉浸泡外源DNA、DNA注射受粉后的子房等； 花粉管通道法：利用植物在受精和胚发育初期接受外源DNA的敏感性 1.外源DNA转化花粉 2.自花授粉后，下柱头，外源DNA滴在柱头，沿花粉管道进入胚囊，转化受精前后的卵细胞 第六十四页，共九十五页。 常用植物基因转化方法特点比较 转化方法 农杆菌法 PEG法 电击法 微针注射法 基因枪法 花粉管通道法 受体材料 完整细胞 原生质体 原生质体 原生质体 完整细胞 卵细胞 宿主范围 有 无 无 无 无 有性繁殖植物 组培条件 简单 复杂 复杂 复杂 简单 无 嵌合体比例 有 无 无 无 多 无 操作复杂性 简单 简单 复杂 复杂 复杂 简单 设备要求 便宜 便宜 昂贵 昂贵 昂贵 便宜 工作效率 高 低 低 低 高 低 单子叶植物应用 少 可行 可行 可行 广泛 广泛 第六十五页，共九十五页。 （三）受体系统 1.原生质体受体系统:嵌合体 少，易变异，再生频率低 原生质体恢复细胞壁具有分化再生能力，是应用最早的再生受体系统之一。 优点：高效、广泛地摄取外源DNA或遗传物质，获得基因型一致的克隆细胞，所获转基因植株嵌合体少，适用于多种转化系统； 缺点：不易制备、再生困难和变异程度高。 第六十六页，共九十五页。 2.愈伤组织受体系统：植体材料经过脱分化培养诱导形成愈伤组织，转化（带有目的基因质粒的农杆菌侵染），分化培养获得再生植株。 愈伤组织易接受外源DNA，转化效率高,适用性广，变异大 优点：外植体来源广，繁殖快，易接受外源基因， 转化效率高。 缺点：遗传稳定性差、嵌合体。因此需要连续的再生系统 第六十七页，共九十五页。 （2）微室培养法：单细胞接种到小室里，密封培养，观测单细胞的生长发育情况 （3）平板培养法：单细胞接种于固体培养基上，获得单细胞形成的细胞系 （4）条件培养法：接种于条件培养基上形成的细胞系。条件培养基指培养过细胞的培养基上清，有植物生长激素等残留，用于制备成固体培养基。 第三十页，共九十五页。 2.单倍体细胞的培养（花药培养）：指将植物单倍体细胞培养成单倍体植株或纯和二倍体植株 一般采取花药作为单倍体细胞的培养对象 用花粉在固体培养基上培养 第三十一页，共九十五页。 3.愈伤组织培养 愈伤组织既是组织又是细胞，为脱分化细胞，具再分化的能力，可用于次生代谢物的生产，也可再生为植株。 第三十二页，共九十五页。 4.毛状根诱导和培养 一些次生代谢产物只有在根里生长 发根农杆菌感染双子夜植物，RI质粒诱导产生毛状根。 形态方面：Ri质粒诱导快速生长的、非定向性、高分支的毛状根的形成 代谢方面：Ri质粒转化根能合成与原植物相同或相似的次生代谢物，并且发根合成次生代谢物具有遗传稳定性。 第三十三页，共九十五页。 毛状根生长快速和次级代谢产物含量高，特别适用于从木本植物和难于培养的植物中得到较高含量的次级代谢产物。 毛状根具有如下特点： 激素自养，不必加外源激素； 次级代谢产物含量高且稳定； 增殖速度快。 第三十四页，共九十五页。 用发根农杆菌经直接注射法，外植体接种感染，原生质体共培养法诱导毛状根 发根农杆菌转化后，经筛选鉴定 低盐浓度下生长，培养 第三十五页，共九十五页。 植物细胞培养工业化存在的问题 生长缓慢,通常完成一次生产周期需4-5周 次级代谢物含量低 培养细胞不稳定等 多数产物积累于胞内 不耐受剪切力 一般的说，只有当次级代谢产物的价格高于1000美元/kg时，才考虑采用植物细胞培养方法。 第三十六页，共九十五页。 第三节 转基因植物 一、转基因植物的产生和发展 （一）转基因植物的基本概念 转基因植物：遗传修饰体(genetically modified organisms, GMOs) 近年发展迅速 应用广泛 第三十七页，共九十五页。 世界第一例