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芪灯明目胶囊对糖尿病视网膜病变大鼠的影响 糖尿病性尿失禁（iii）是糖尿病最常见、最严重的微血管并发症之一。这是成人失明的主要原因，在中国，发病率为1.3%。 根据糖尿病视网膜病变气阴两虚、瘀血阻络的主要病机, 以养阴益气,活血通络立法,成都中医药大学采用葛根、黄芪、灯盏细辛三味药为原药材,研发出已获临床批件,对糖尿病视网膜病变有治疗效果的中成药芪灯明目胶囊。前期药理学研究表明,芪灯明目胶囊可以降低自发性糖尿病大鼠玻璃体VEGF的水平,抑制新生血管的形成,可明显减少STZ诱导的糖尿病大鼠视网膜血管的渗漏,减轻高血糖导致的血-视网膜屏障损害,从而对糖尿病视网膜组织有一定的保护作用 1 实验动物及仪器 1. 1试验药物芪灯明目胶囊( 含葛根素178. 78 mg / g、野黄芩苷11. 21 mg/g) ,葛根总异黄酮提取物( 含葛根素19. 81% ,总异黄酮48. 00% ) ,灯盏细辛总黄酮提取物( 含野黄芩苷3. 39% , 总黄酮50. 66% ) ,黄芪总皂苷提取物( 含黄芪甲苷5. 77% ,总皂苷53. 30% ) ,以上受试药物均由太极集团重庆涪陵制药厂有限公司提供,采用高效液相色谱法对胶囊中葛根素与野黄芩苷进行含量测定,符合每粒胶囊含葛根素不得少于50. 0 mg/粒,野黄芩苷不得少于2. 5mg/粒的质量标准要求; 羟苯磺酸钙胶囊由西安利君制药有限责任公司,批号: 1305056-1。 1. 2动物SPF级SD大鼠,雄性,63只,体重( 250 ± 20) g,购于成都达硕生物科技有限公司,生产许可证号: SCXK( 川) 201324。普通颗粒饲料和高脂饲料均由成都达硕生物科技有限公司提供。 1.3试剂链脲佐菌素(美国Sigma公司,批号:SLBB7526V)。缺氧诱导因子1-α(HIF-1α,武汉优尔生,批号:L140915388) ; 血管内皮 生长因子 ( VEGF,美国RD,批号: 321519) ; 血管紧张素Ⅱ( ANGⅡ,美国RD,批号: 321614) ; 细胞间黏附分子-1( ICAM-1,美国RD,批号: 322655) ; 一氧化氮( NO美国RD,批号: 317168) ; 肿瘤坏死因子 α( TNF-α,武汉优尔生, 批号: L140814239 ) ; 丙二醛 ( MDA,武汉优尔 生,批号: L140910294) ; 超氧化物歧 化酶1 ( SOD1,武汉优尔 生,批号: L140915390) 测试试剂盒。 1.4仪器Varioskan全波长多功能酶标仪(ThermoFisherScientific);血糖仪(Accu-ChekActive,RocheDiagnosticsGmbH)。 1.5方法 1. 5. 1糖尿病视网膜病变大鼠模型制备造模组大鼠以高脂饲料喂养,6周后禁食不禁水12 h,采用腹腔注射柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液配制的链脲佐菌素40 mg/kg建立糖尿病视网膜病变大鼠模型。72 h后大鼠尾尖取血,测定空腹血糖,选用禁食4 h后血糖值≥16. 67 mmol / L的动物作为模型动物。模型大鼠高脂饲料喂养1个月后以普通饲料喂养,正常对照组大鼠均以普通饲料喂养,每日进行大鼠常规观察,造模期间每2周记录饲料消耗量、饮水量及称定大鼠体重,定期测定大鼠血糖,参照文献进行糖尿病视网膜病变模型评价 1. 5. 2检测指标及方法将糖尿病视网膜病变大鼠随机分为模型对照组、羟苯磺酸钙组、芪灯明目胶囊组、葛根总异黄酮组、 灯盏细辛总黄酮组、黄芪总皂苷组,另设正常对照组。羟苯磺酸钙给药剂量为150 mg/kg,芪灯明目胶囊给药剂量为600 mg/ kg; 葛根总异黄酮给药剂量为421 mg / kg,灯盏细辛总黄酮给药剂量为136 mg/kg,黄芪总皂苷给药剂量为43 mg/kg。 1. 5. 4统计学方法采用SPSS 18. 0和R语言进行统计学分析。实验测试指标的数据资料以均数 ± 标准差表示,组间差异比较采用单因素方差分析,P 0. 05为差异有统计学意义。并采用R语言对所有63个样本最终9个指标数据( 2. 2、2. 3、2. 4项下指标及末次血糖值) 进行主成分分析,分析结果的输出形式包括主成分因子图、得分图和载荷图三种。 2 各组大鼠血糖、炎症及血糖指标比较 2. 1芪灯明目胶囊及各有效组分对糖尿病视网膜病变大鼠一般情况、体重和血糖的影响实验过程中各组大鼠体重生长曲线见图1A,血糖曲线见图1B。正常对照组大鼠摄食、饮水量正常,精神状态良好。由图1A可见体重随月龄增大逐渐增加,与正常对照组比较,模型组大鼠出现多饮、多食、多尿等症状,体重增长趋势明显降低,饮水消耗量明显增加,易感染,精神萎靡,并随病程进展逐渐加重,甚至出现白内障。与模型对照组比较,各给药组体重变化无明显差异