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枯草芽孢杆菌微生物传感器的毒性分析 近几十年来，随着工业化水平的提高和对原材料的高需求，各种化学品的数量增加，环境造成的污染日益严重。 作者在前期的研究中, 采用基于氧化还原介质的电流型微生物传感器毒性分析系统, 以大肠杆菌为受试微生物, 对几种重金属和有机物的急性毒性进行了分析 石油废水为胜利油田现河采油厂乐安联合站的外排污水, 石油泵、COD、挥发酚、氨氮浓度分别为8.2, 150, 0.18, 5.87mg/L 1 材料和方法 1.1 材料表面 主要化学药剂:Pb Cl 1.2 微生物传感器毒性分析系统的原理和方法 基于氧化还原介质的电流型微生物传感器毒性分析系统的原理及毒性分析步骤见文献[14]. 1.3 菌种生长测定 用接种环取定量从活性污泥中筛选出的Bacillus subtilis纯菌株, 接种至装有50m L LB培养基溶液的150m L三角瓶中, 在恒温摇床中30℃, 150r/min培养24h, 按0.2%的接种量将培养液再次接种到50m L LB培养液中进行菌体培养, 定时取样测定D 1.4 湿菌体的制备 取一定量Bacillus subtilis纯菌株接种于200m L培养基溶液中, 在恒温摇床中30℃, 150r/min培养24h后, 在5000r/min下离心30min, 用0.85%Na Cl溶液洗涤菌体3次, 在10000 r/min下离心5min, 得到湿菌体.取0.5g湿菌体, 加入200μL 0.85%Na Cl溶液, 用灭菌牙签将菌体和水溶液搅匀, 用移液枪汲取7μL均匀涂于电极工作区域表面, 室温晾干;用双面胶纸 (3M公司) 将聚碳酸酯膜 (孔径0.4μm, Whatman) 密封在菌体表面, 制得微生物电极, 置于冰箱4℃保存待用. 2 结果与讨论 2.1 不同培养周期的bacllussubtilis微生物传感器对d 由图1可知, Bacillus subtilis在0~16h, 细菌数量以几何级数增加, 处于细菌生长周期的对数期;16~36h, OD 由于不同生长阶段的微生物具有不同的活性代谢特征, 因此, 采用不同培养阶段的微生物制备的微生物传感器的毒性分析性能会有所不同本试验取10, 20, 48h3个不同培养时间的Bacillus subtilis菌体, 采用聚碳酸酯膜直接固定法制备Bacillus subtilis微生物电极, 分别用于Cu 由图2可见, Bacillus subtilis培养周期为10, 20h时制备的微生物传感器对Cu 2.2 重金属离子毒性分析 Bacillus subtilis型微生物传感器对Cd 2.3 有机物污染物毒性分析 试验采用Bacillus subtilis微生物传感器对2-NP、4-NP、2-CP、2, 4-DCP、四环素和十二烷基苯磺酸钠等有机物的急性毒性进行分析 (图4) .由图4可以看出, 随着几种有机物加入浓度的增加, Bacillus subtilis微生物传感器的抑制电流信号亦呈现明显的下降趋势.测试得2-NP、4-NP、2-CP、2, 4-DCP、四环素和十二烷基苯磺酸钠等有机物对Bacillus subtilis的EC 上述研究可以看出, 不同种群微生物对污染物的毒性敏感性存在一定的差别, 选择固定特定毒性敏感菌种用于不同污染物的毒性分析, 可有效克服如发光菌等毒性分析方法菌株选择的局限性, 毒性反映结果更真实. 2.4 bacillussubtiris立法例 采用Bacillus subtilis微生物传感器对经隔油过滤之后出水的综合毒性进行分析, 所得抑制电流曲线见图5. 由图5可以看出, 该石油废水对Bacillus subtilis的抑制作用不明显, 当石油废水加入浓度较低时, 该微生物传感器检测的电流信号明显升高, 表现出对Bacillus subtilis代谢活性具有一定的促进作用, 这是由于该油田废水采出后已经过“隔油-混凝-过滤”等工艺处理的毒性污染物浓度较低 (其中:挥发酚和石油类物质的浓度分别为0.18, 8.2mg/L) , 因此, 当低投加比时, 废水中的易于生物降解有机物对Bacillus subtilis活性存在一定的基质作用, 导致检测电流信号升高, 作者前期采用E.coli生物传感器分析垃圾渗滤液的毒性时, 亦发现有相似现象 3 结论 3.1 3.2 毒性分析性能 基于对数生长期和稳定期Bacillus subtilis菌株 (培养周期为16~36h) 的微生物传感器具有良好的毒性分析性能, 基于衰减期Bacillus subtilis菌株 (培养周期为48h) 的微生物传感器毒性分析的稳定性和灵敏性降低. Bacillus subtilis型微生物传感器对重金属和有机物的急性毒性具