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十二烷基苯磺酸钠与牛血清白蛋白相互作用的荧光光谱和紫外光谱研究 苯磺酸钠（sdbs）是一种合成阴离子表面活性剂，广泛用于日常生活和工业生产。生活污水和生产废水中含有大量的SDBS 血清白蛋白是人和动物血浆中含量最丰富的蛋白质, 它能够和许多内源性和外源性物质广泛结合 1 实验部分 1.1 仪器和检测方法 仪器:Cary Eclipse荧光分光光度计 (美国瓦里安公司) ;Cary5000紫外可见分光光度计 (美国瓦里安公司) ;温度控制计 (美国瓦里安公司) ;AY-120电子分析天平 (日本, 岛津) ;p Hs-3C型酸度计 (上海精密仪器有限公司, 精度±0.01) 。 试剂:牛血清白蛋白 (北京奥博星生物技术责任有限公司) 生化试剂;十二烷基苯磺酸钠 (国药集团化学试剂有限公司) 分析纯;三 (羟甲基) 氨基甲烷 (国药集团化学试剂有限公司) 分析纯;氯化钠 (国药集团化学试剂有限公司) 优级纯。 1.2 同浓度bsa、sdbs和sdbs-bsa体系的吸收光谱 荧光光谱:在1×1cm石英比色皿中准确加入3.0m L1.0×10 紫外吸收光谱:在200-450nm区间, 分别测定同浓度BSA、SDBS和SDBS-BSA (1:1, 3:1, 5:1) 体系的吸收光谱。 同步荧光光谱:用荧光光谱实验时所配的温度为298K的溶液, 固定激发和发射波长间隔Δλ分别为15nm和60nm, 同时扫描激发和发射波长并记录同步荧光光谱。 2 结果与讨论 2.1 dbs加入bsa的荧光强度 图1显示SDBS对BSA内源荧光的猝灭作用, 随着SDBS的加入BSA的荧光强度不断降低, 且有蓝移的趋势。说明SDBS与BSA发生了相互作用, 这种作用能引起BSA中荧光发射团的微环境及蛋白质分子构象行为的变化 2.2 数据处理结果 有关猝灭机理及猝灭方式的判断参见文献[5-6]。采用Stern-Volmer方程处理数据结果见表1和图2。由图2可知当SDBS浓度与蛋白浓度比大于10时曲线偏离原来的方向向X轴靠拢, 说明SDBS在BSA上有两类结合部位且第一类结合部位的猝灭效应较强 2.3 反应的变系数 猝灭体和生物大分子的相互作用主要有氢键、范德华力、静电引力和疏水力, 当温度相差不大时可以把反应的焓变看成一个常数, 由Lineweaver-Burk方程中不同温度下的结合常数K 2.4 蛋白质吸收带 图3为SDBS对BSA紫外吸收光谱的影响。由图3可见, 牛血清白蛋白在紫外光谱区显示了两个特征的蛋白质吸收带, 其峰位置分别为210nm和278nm。210nm处的吸收峰则主要是有肽键上羰基的n-π*电子跃迁引起的;278nm处的吸收峰是BSA分子中的2个色氨酸和20个酪氨酸残基的芳杂环π-π*和n-π*电子跃迁引起的 2.5 同步荧光光谱 SDBS对BSA同步荧光光谱图 (图4) 中的 (A) (Δλ=15nm) 和 (B) (Δλ=60nm) 分别为加入不同量的SDBS后BSA中的酪氨酸 (A) 和色氨酸 (B) 残基的同步荧光光谱图, 可以看出在Δλ=60nm时, 色氨酸残基 (Trp) 荧光强度随着SDBS浓度的增大显著降低, 同时发射波长蓝移, 这表明BSA分子构象发生了变化, 使得色氨酸残基周围的疏水性增强, 极性减弱;Δλ=15nm时, 酪氨酸残基 (Tyr) 的荧光强度随着SDBS浓度的增大而增大, 且发射波长基本不变。说明SDBS主要是与色氨酸残基相互作用。BSA分子构象的变化使Tyr残基与Trp残基之间的距离发生改变, 造成两者之间的能量转移随着猝灭反应的进行逐渐减弱。因此随着SDBS浓度增大, Tyr的荧光强度逐渐增大。 3 荧光创造机理 SDBS对BSA内源荧光具有强烈的静态猝灭作用, 两者之间发生反应生成了不发荧光复合物是导致荧光猝灭的主要原因。在生理温度下两者的结合常数为7.96×10