来源于葡萄球菌的N-乙酰神经氨酸裂合酶的基因克隆及性质.docxVIP

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2023-07-21 发布于山东
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来源于葡萄球菌的N-乙酰神经氨酸裂合酶的基因克隆及性质.docx

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480 480 生物工程学报 Chinese Journal of Biotechnology /cjbcn 周传华等/来源于葡萄球菌的 N-乙酰神经氨酸裂合酶的基因克隆及性质 April 25, 2013, 29(4): 480-489 ?2013 Chin J Biotech, All rights reserved 工业生物技术工业生物技术来源于葡萄球菌的 N- 乙酰神经氨酸裂合酶的基因克隆及性质周传华 1,2，陈曦 2 ，冯进辉 2，肖冬光 1 ，吴洽庆 2，朱敦明 2 1 天津科技大学生物工程学院，天津 300457 2 中国科学院天津工业生物技术研究所工业酶国家工程实验室，天津 300308 周传华, 陈曦, 冯进辉, 等. 来源于葡萄球菌 N-乙酰神经氨酸裂合酶的基因克隆及性质. 生物工程学报, 2013, 29(4): 480-489. Zhou CH, Chen X, Feng JH, et al. Molecular cloning and characterization of a N-acetylneuraminate lyase gene from Staphylococcus hominis. Chin J Biotech, 2013, 29(4): 480-489. 摘要: 葡萄球菌 Staphylococcus hominis 来源的 N-乙酰神经氨酸裂合酶基因 shnal (GenBank Accession No. EFS20452.1) 构建至 pET-28a 质粒并在大肠杆菌中得到表达。通过目的蛋白的纯化和酶学性质研究发现， ShNAL 是一个四聚体，裂解方向的最适反应 pH 为 8.0；合成方向的最适反应 pH 为 7.5，最适反应温度为 45 ℃。在 45 ℃下孵育 2 h 对 ShNAL 的活力基本无影响，高于 45 ℃时，活力迅速下降。该酶在 pH 5.0~10.0 的环境中比较稳定， 4 ℃下放置 24 h 酶的残余活力在 70％以上。 ShNAL 对 N-乙酰神经氨酸 (Neu5Ac) 、N- 乙酰甘露糖胺 (Man) 和丙酮酸 (Pyr) 的Km 值分别是 (4.0±0.2) mmol/L、(131.7±12.1) mmol/L 和 (35.1±3.2) mmol/L，kcat/Km 值分别为 1.9 L/(mmol·s)、0.08 L/(mmol·s) 和 0.08 L/(mmol·s)。关键词 : 葡萄球菌， N- 乙酰神经氨酸裂合酶，表达，纯化，生物催化 Received: September 19, 2012; Accepted: November 30, 2012 Supported by: National Basic Research Program of China (973 Program) (No. 2011CB710801). Corresponding author: Qiaqing Wu. Tel/Fax: +86-22 E-mail: wu_qq@ Dunming Zhu. Tel/Fax: +86-22 E-mail: zhu_dm@ 国家重点基础研究发展计划 (973 计划) (No. 2011CB710801) 资助。 481周传华等/来源于葡萄球菌的 N-乙酰神经氨酸裂合酶的基因克隆及性质 481 Molecular cloning and characterization of a N-acetylneuraminate lyase gene from Staphylococcus hominis Chuanhua Zhou1,2, Xi Chen2, Jinhui Feng2, Dongguang Xiao1, Qiaqing Wu2, and Dunming Zhu2 1 College of Bioengineering, Tianjin University of Science and Technology, Tianjin 300457, China 2 National Engineering Laboratory for Industrial Enzymes, Tianjin Institute of Industrial Biotechnology, Chinese Academy of Sciences, Tianjin 300308, China Abstract: A N-acetylneuraminate