《红茶中茶黄素类化合物的提取与鉴定》实验综述报告.docx

? ? 《红茶中茶黄素类化合物的提取与鉴定》实验综述报告 ? ? 崔朋 黄山学院分析测试中心 安徽黄山 245041 近年来，综合化学实验的教学模式引起诸多学校的关注，综合实验把多学科的知识与技能综合交叉起来，有效地将各学科的实验操作及数据分析融合为一体，接受实验训练的学生可在一次实验中充分锻炼提升综合实验操作能力。同常规的专业实验对比，综合化学实验更加注重的是学生对基本知识的掌握和实验技能的训练操作，以及对实验数据的解析。同时重点培养学生在实验过程中分析问题和解决问题以及运用已掌握的知识归纳分析和总结实验的能力[1]。所以综合化学实验的开展内容囊括经典化学实验操作的同时，还应该根据地域及关注热点的变化及时调整更新，本实验介绍一个取材于黄山当地以红茶为原料开展综合化学实验——红茶发酵过程中茶黄素的提取与鉴定分析。 茶黄色素由Roberts发现，最初单指红茶中溶于有机相中呈橙黄色的物质，该类物质由多酚类及其衍生物在酶等物质的作用下氧化缩合而来，红茶中茶黄素类的含量一般为1%左右，对红茶的色、香、味及品质起着重要的作用。近年来，由于茶黄色素具有多种与人体健康有益的潜在功能，如抗自由基氧化、心血管疾病的防治、降血压血脂等，因而受到国内外的广泛关注，成为茶叶品质化学与功能成分的研究热点。因此，茶黄素的研究受到国内外的广泛关注[2-3]，使红茶的品质化学与功能成分研究成为热点[4]。本实验依据国标推荐方法中的溶剂体系和提取方法对红茶中的茶黄素进行提取，提取液经处理完成后，采用超高效液相色谱串联四极杆飞行时间质谱，结合UNIFI数据处理筛查软件对提取液中的茶黄素进行分离鉴定分析。 1 实验目的 熟悉天然产物提取的流程和方法；了解高分辨质谱的进样要求、基本原理和一般操作流程；掌握天然产物分离分析的步骤和鉴定方法。 2 实验原理 2.1 茶黄素的提取 茶黄色素以多酚类物质和儿茶素类物质为主要成分，还含有氨基酸、黄酮及黄酮醇等。茶黄素是茶色素的主要成分，目前资料显示有12种组分，其中茶黄色素以多酚类物质、儿茶素为主要成分，还含有氨基酸、维生索C、维生素E、维生素A原、黄酮及黄酮醇等。这些主要成分的12种组分，其中茶黄素(Cas：4670-05-7)，茶黄素-3-没食子酸酯(Cas：28543-07-9)、茶黄素-3，3’-双没食子酸酯(Cas：30462-35-2)和茶黄素-3’-没食子酸酯(Cas：33377-72-9)是四种最主要的茶黄素。本实验即围绕上述四种茶黄素物质的提取及检测开展实验。因茶黄素均为多羟基化合物，固本体系参照国标同样采用无水乙醇和水对红茶中的茶黄素化合物进行提取，具体提取操作如下所述。称取0.2g左右的红茶样品，将其粉碎后研磨均匀，倒进10mL的玻璃刻度试管中，加入预热过的无水乙醇溶液3.5mL，再加入水1.5mL，用玻璃棒充分搅拌均匀湿润，转移到水浴锅中，将水浴锅温度加热至70℃，浸提10min(隔5min搅拌一次)，浸提后冷却至室温，将上清液转移至50mL容量瓶中。残渣再用3.5mL的70℃无水乙醇溶液和1.5mL水提取一次，合并提取液定容至50mL容量瓶中，摇匀，过0.25μm膜待测。 2.2 茶黄素的快速筛查检测 高分辨飞行时间(HR-Tof)质谱系统为在构建包括蛋白质组学、代谢组学、天然活性成分、中药、药物代谢、糖肽等物质的研究中起着非常重要的作用，作为高端技术平台，该系统具有高分辨的定性筛查功能和高灵敏度的准确定量功能，辅以UNIFI数据筛查软件和自行建立的筛查平台，可实现目标物准确有效、快速筛查。 在本实验中，我们使用UNIFI软件包(UNIFI科学信息系统，Waters Corp.，MA)建立了一个信息学数据库。该软件包融合了超高效液相色谱和飞行时间质谱的操作、质谱数据采集、可视化的数据分析和使用先前建立的信息中获得的数据进行处理。该实验建立数据库包含用于在UNIF中自动识别儿茶素的关键检测参数，其中包括每种化合物的理论质荷比和碎片离子。实验前先明确设置上述参数，就可以使用UNIFI数据库对四种目标茶黄素进行快速筛选和鉴定。 本实验的流动相体系采用0.1%的甲酸水溶液和甲醇对提取样品进行洗脱，经优化后的质谱条件可获得信号较好的总离子流图及紫外信号图，如图1所示，二者具有良好的对应，信号最强的为咖啡因信号，前端的信号主要为儿茶素类化合物，因其极性较大，色谱柱对该类化合物的保留能力相对较弱，故出峰较为靠前。在质谱总离子流及紫外检测器的信号谱图中的14.6～15.4min中，紫外图谱中的四个检出信号(图1右上所示)即为四种茶黄素类化合物，检出目标物的出峰顺序与国标(GB/T 30483-2013)推荐图谱的信息一致。 以国标推荐的方法为参考对红茶的提取液进行测试，质谱信号明显清晰，随后将采集的数据导入U