不同光质对人参愈伤组织生长及皂苷含量的影响.docxVIP

? ? 不同光质对人参愈伤组织生长及皂苷含量的影响 ? ? 任跃英，牛 晨1,，王京京1,，杨 鹤1,，许永华1,*，刘 志* 1. 吉林农业大学人参新品种选育与开发国家地方联合工程研究中心，吉林 长春 130118 2. 吉林农业大学中药材学院，吉林 长春 130118 引 言 人参(PanaxginsengC.A. Mey.)是五加科人参属多年生药用植物，人参肉质根为著名的强壮滋补药，味甘、微苦，微温，具有大补元气，复脉固脱，补脾益肺，生津养血，安神益智之功效[1]。 人参在《神农本草经》中被列为上品滋补药物，具有“多服久服不伤身，轻身益气不老延年”的作用[2]，其具有多种生物活性，包括抗肿瘤、调节免疫力、抗衰老和抗疲劳等，同时亦有提高记忆力和改善心肌缺血损伤作用[3]。 人参含有多种化学成分, 包括人参皂苷、多糖、蛋白质、氨基酸、黄酮类、无机元素、维生素等物质，而人参皂苷是人参中主要的活性成分，属于三萜类皂苷，根据糖苷配基结构不同分为达玛烷型四环三萜类和齐墩果酸型五环三萜类(主要包括Ro)[4]，达玛烷型人参皂苷又根据其苷元不同分为原人参二醇型(PPD型，主要包括Rb1，Rb2，Rb3，Rc，Rd)和原人参三醇型(PPT型，主要包括Rg1，Re和Rf)[5]。 人参育种工作已经开展了几十年，但发展缓慢，是由于人参自身的某些特性所导致的[6]。 利用植物组织培养技术可使植物实现离体快繁，大大缩短育种时间。 在植物组织培养过程种，光是重要的影响因素之一。 有研究表明，光质对植物的结构发育及形态有很大的影响[7]，对于次生代谢产物的产生有促进作用[8]，并且对完整植物和离体的植物组织均有影响[9]。 而光质对于植物的影响会因植物种类的不同而产生不同的影响[10]。 目前，有关光质对人参愈伤组织皂苷含量影响还没有相关研究。 本工作以人参愈伤组织为试验材料，探究光质对人参愈伤组织中人参皂苷含量的影响，旨在提高人参皂苷含量。 1 实验部分 1.1 试验材料 人参采自吉林农业大学药植园，愈伤组织由二年生人参越冬芽诱导而来。 1.2 方法 1.2.1 人参愈伤组织诱导与培养 取二年生人参越冬芽，先用流水冲洗4～6 h，除去泥土，再用洗洁精进行表面清洗，后用滤纸吸干表面水分，放入干净的组培瓶中转至超净工作台。 将人参越冬芽外植体用75%酒精消毒15～20 s，再用无菌水冲洗1次，0.1%升汞消毒10～15 min，无菌水冲洗4～5次。 人参愈伤组织的诱导与继代培养基为MS基础培养基，添加蔗糖30 g·L-1、琼脂7 g·L-1，2,4-D 2.0 mg·L-1、6-BA 1.0 mg·L-1，pH 5.8。 培养条件为暗培养，温度(25±2)℃，湿度60%。 1.2.2 不同光质处理人参愈伤组织及其形态观察 以培养4周且生长状态良好的人参愈伤组织为材料，接种至MS基础培养基中，每瓶均匀接种5块，每块鲜重约0.2 g，每个处理30瓶，重复3次，共接种180 瓶。 将其平均分为 6 组，分别置于红光、红蓝光、蓝光、绿光、黄绿光、黑暗(CK)五 种不同光质条件下培养。 不同光源技术参数如表1所示。 培养温度(25±2) ℃，光照时长16 h·d-1，光照强度(200±10) μmol·m-2·s-1，培养28 d，在第5，15，21，25和30 d时拍照、观察并记录其形态。 表1 不同LED光源技术参数Table 1 Different LED light source technical parameters 1.3 项目测定 收获培养28 d的人参愈伤组织，用滤纸吸干其表面水分，称重，记为鲜重，后置于40 ℃烘箱中烘干至恒重，称其重量记为干重，再用研钵研磨成粉末，过80目筛，保存备用。 精密称取0.1 g的样品粉末，置于5 mL的离心管中，加入2.5 mL氨水-水-甲醇溶液(NH3+H2O+CH3OH=4+21+75，V:V), 封口胶封住管口，用混匀器混匀，超声提取30 min(功率600 W，频率35 kHz)，静置48 h，取上清液，0.22 μm微孔滤膜过滤，用超高相液相色谱进行检测。 每个样品重复3次。 1.4 数据分析 用DPS对实验数据进行分析，采用Duncan新复极差法进行显著性分析，Excel 2019进行图形分析。 2 结果与讨论 2.1 不同光质对人参愈伤组织形态的影响 不同光质处理对人参愈伤组织生长及形态变化有明显差异。 如图1所示，蓝光处理下人参愈伤组织最早出现发白现象，且边缘产生灰色物质[图1(A1)]，处理第30 d时，愈伤组织逐渐呈灰白色，愈伤块增大[图1(A5)]；红光处理下人参愈伤组织也出现变白现象，但程度低于蓝光处理[图1(B1)]，后又呈现黄白色，处理第30天时，与对照相比，红光处理后的愈伤偏