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聚谷氨酸的保湿功效及安全性研究 聚谷氨酸又名h-聚谷氨酸，是干草芽菌发酵合成的胞外粘性物质。d-谷氨酸和l-谷氨酸由c-谷氨酸和l-谷氨酸结合而成，通常含量为10-2000g/s。 笔者利用皮肤水分测试仪,分别比较不同分子量和不同质量分数聚谷氨酸的保湿特性,并对其人体安全性进行评价,为聚谷氨酸在化妆品中的应用提供参考依据。 1 实验部分 1.1 实验用水及仪器 聚谷氨酸( 分子量为10,100,1 200和1 400 k Da) 、透明质酸钠( 分子量为1 400 k Da) ,山东福瑞达生物医药有限公司; 实验用水为去离子水。CM825型皮肤水分测试仪,德国Courage Khazaka公司; 斑贴试验胶带,上海医疗器械( 集团) 有限公司卫生材料厂。 1.2 测试方法及结果 采用皮肤水分测试仪对使用化妆品后的皮肤水分含量( mean moisture value,MMV) 进行测定。 选取24 ~ 35岁的女性志愿者30人,且受试者须符合以下条件: 前臂测试区域的MMV为15 ~ 45; 无严重系统疾病、免疫缺陷或自身免疫性疾病; 无活动性过敏性疾病; 对护肤类化妆品无严重过敏史; 近1个月内未使用激素类药物及免疫抑制剂; 未参加其他临床实验。测试环境温度保持( 22±1) ℃,相对湿度保持( 40±5) % 。受试者测试前使用35℃左右的清水擦拭双臂,再进入测试环境休息30 min后开始测试。 分别将分子量为10,100,1 200和1 400 k Da的聚谷氨酸配制成质量分数为0. 1% ,0. 2% ,0. 3% ,0. 4%和0. 5% 的测试样品液,以质量分数为0. 1% 的透明质酸钠溶液( 分子量为1 400 k Da) 作为阳性对照。在受试者双手前臂内侧做好测量标记区域,共6个区域,每个实验区域大小为3 cm×3 cm,区域间隔1 cm。在受试者的每个测试区域分别涂抹500μL质量分数为0. 1% ,0. 2% ,0. 3% ,0. 4% 和0. 5% 的聚谷氨酸溶液( 同一分子量) 以及质量分数为0. 1% 的透明质酸钠溶液,测试样品均随机分布。 采用皮肤水分测试仪,分别测量涂抹样品前和涂抹样品2和4 h后受试区域的皮肤水分含量,以评价聚谷氨酸的保湿性能。每个区域平行测定5次,以平均值作为测量数据MMV值,测试由同一个测量人员完成。以涂抹样品前的数据作为空白对照,皮肤水分含量变化率计算公式如下: MMV变化率 = 测量值 / 空白值×100% 采用SPSS 17. 0软件进行数据分析,组间比较采用t检验。* ,表示P 0. 05,差异显著; **,表示P 0. 01,差异非常显著。 1.3 年—化妆品安全性评价方法 人体皮肤斑贴试验是评价化学物质皮肤安全性的常用实验方法之一。实验采用皮肤封闭型斑贴试验,对质量分数 为1% 的聚谷氨 酸水溶液 ( 分子量为1 200 k Da) 进行人体皮肤斑贴试验。聚谷氨酸人体皮肤安全性( 人体皮肤斑贴试验) 由北京中德联合化妆品研究所有限公司进行评价。 经专业人员培训过的21 ~ 63岁健康女性受试者30名,无皮肤或系统性疾病史,受试部位无异常,且受试期间不涂抹任何与实验无关的药物或者化妆品。选用合格斑贴试验胶带,将0. 025 m L质量分数为1% 的聚谷氨酸受试物( 分子量为1 200 k Da) 滴加在斑试器所附的滤纸片上置于斑试器内,对照孔为空白对照( 蒸馏水) 。将加有受试物的斑试器用无刺激胶带贴敷于受试者的背部,用手掌轻压使之均匀地贴敷于皮肤上。持续24 h后去除受试物斑试器,分别于去除斑试器后的0. 5,24和48 h观察皮肤反应,并根据《化妆品卫生规范》( 2007年版) 中人体皮肤反应分级标准记录其结果。 2 结果与讨论 2.1 含量大小大小的含量大小 MMV变化率反映测试周期内实验区域水分含量大小。以涂抹受试物之前的数据作为空白对照,设为100% ,当MMV变化率大于100% 时,表明受试物具有保湿功效。 2.1.1 聚氨基酸的保湿功效 不同分子量的聚谷氨酸在不同质量分数下的保湿功效如表1所示,实验结果如下: 1) 分子量为10 k Da的聚谷氨酸: 在受试者涂抹质量分数为0. 2% 的聚谷氨酸2 h后,其皮肤的MMV变化率为 ( 102. 5±0. 3 ) % ,高于空白 对照 ( * ,P 0. 05) ; 而在受试者涂抹质量分数为0. 1% ,0. 3% ,0. 4% 和0. 5% 该分子量的聚谷氨酸受试物2和4 h后,其皮肤的MMV变化率均小于100% ,皮肤水分含量小于空白对照。这表明分子量为10 k Da的聚谷氨酸保湿能力较弱,仅在其质量分数为0. 2% 时有保湿能力。 2) 分子量为100 k Da的聚谷氨酸: 在受试者分别涂抹质量