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不同物种角骨比例对红外光谱的影响 国家二级保护野生动物赛加山羊(。 衰减全反射红外光谱 (ATR-FTIR) 技术应用十分广泛, 近年来在中药材鉴定、质量评价及中药材产地追溯等方面的应用性研究逐渐加深并凸显优势 1 材料和方法 1.1 样本和材料来源 赛加羚羊角 (其中部分含骨芯) 13支 (编号L1-L13) 、黄羊角4支 (编号H1-H4) 、牛角2支 (编号N1-N2) , 样本均来自国内药材公司库存, 年龄不详。 1.2 设备 美国PerkinElmer公司的Frontier傅立叶变换红外光谱仪, DTGS检测器, 光谱分辨率为4 cm 1.3 实验方法 1.3.1 骨芯平均图谱 L1-L10分别于角质壳基部、中部、尖部取样, 磨粉制成实验样本, 共30份 (表1) ;L3、L4、L6、L7内部骨芯取样, 磨粉制成实验样本, 共4份用于制作骨芯平均图谱 (表1) ;L11-L13的角质壳和骨芯分别取样磨粉, 并按角骨比例1∶1、1∶2、1∶3混合制成实验样本, 共9份 (表1) ;H1-H4及N1、N2均在基部取样, 磨粉制成实验样本 (表1) 。 1 1.3.2 赛加羚羊角的红外图谱分析 考虑到牛科 (Bovidae) 动物角生长的特性及目前市售饮片尤其是羚羊角粉的实际情况, 为达到建立赛加羚羊角鉴别标准的目的, 将可能对其ATR-FTIR检测结果产生影响的因素进行逐一分析, 设计了4组实验, 分别对赛加羚羊角同一样本不同部位、不同样本相同部位、角质外壳与骨芯不同比例混合样本的红外图谱进行比较分析, 以及赛加羚羊角与牛角、黄羊角的红外图谱进行比较分析。 1.3.3 设备操作 实验样本置于样品台上, 调节仪器开始扫描, 每个样本扫描32次, 实验室内保持干燥通风, 扫描过程可排除水和二氧化碳影响。 2 结果与分析 2.1 红外图谱的建立 对羚羊角L1-L10角质壳制得的10组30份样本进行ATR-FTIR检测, 数据分别导入Orgin软件, 得到的图谱经13点平滑、基线校正及纵坐标归一化处理 (后文中样本亦如此处理, 不再赘述) , 最后形成10组红外图谱 (图1) 。使用Omnic 8.0软件对检测数据进行计算, 得出相关系数 (表2) 。结果显示, 在同一支羚羊角的不同部位取样获得的红外图谱相关系数为96.69%—99.43%, 存在0.57%—3.31%的差异。 2.2 红外图谱的比较 取羚羊角L1-L10角质壳制得的30份样本进行ATR-FTIR检测, 获得数据分别导入orgin软件得到红外图谱, 将同一取样部位的10个红外图谱进行比较 (图2) 。使用Omnic 8.0软件对检测数据进行计算, 得出相关系数 (表3, 表4, 表5) 。结果显示, 不同羚羊角在相同部位取样所获得红外图谱相关系数为94.24%—99.43%, 存在0.57%—5.76%的差异。 2.3 骨芯和羚羊角的红外图谱比较 取角骨混合样L11-1、L11-2、L11-3、L12-1、L12-2、L12-3、L13-1、L13-2和L13-3进行ATR-FTIR检测, 所得数据导入Orgin软件, 获得3组红外图谱, 分别与骨芯平均图谱 (骨芯样本L3-4、L4-4、L6-4、L7-4的ATR-FTIR检测数据导入Orgin软件处理得到) 及羚羊角角质壳平均图谱 (由L1-10的30个ATR-FTIR检测数据导入Orgin软件处理得到) 进行对比 (图3) 。将检测数据导入Omnic 8.0软件计算相关系数 (表6) 。结果显示:骨质成分的存在对羚羊角的红外图谱产生极大的影响, 随着混合物中骨质成分的增多, 其红外图谱与羚羊角壳红外图谱的相关系数减小。 2.4 种间关系数检测 取羚羊角L1-L10、黄羊角H1-H4、牛角N1、牛角N2进行ATR-FTIR检测, 数据分别导入Orgin软件获得各物种平均图谱 (图4) 。根据检测数据, 利用Omnic 8.0软件计算其种间相关系数 (表7) 。显示, 黄羊角、牛角、羚羊角三者之间红外图谱相关系数为99.28%—99.47%, 其0.53%—0.72%的差异小于赛加羚羊个体间甚至是同一样本不同取样部位的差异。从图谱中可见各样本均有明显的酰胺特征吸收谱带, 酰胺I带由C=O基团伸缩振动产生, 酰胺II带由C-N键的伸缩振动和N-H的面内弯曲振动引起, 羚羊角的酰胺I带出现在1 641cm 3 样本检测结果的分析 经过对13支羚羊角 (含骨芯) 、4支黄羊角、2支牛角进行ATR-FTIR检测, 并计算分析其图谱的相关系数, 得出结论如下。 3.1 不同个体赛加羚羊角的红外图谱存在0.57%—5.76%的差异, 同支羚羊角不同取样部位的红外图谱尽管高度相似, 但仍存在0.57%—3.31%的差异,