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蒸汽爆破茯苓多糖提取工艺优化 椰子是多孔细菌科的一种干燥的细菌。它性平，甜而清淡，属于心、肺、脾和肾。它对利尿、补水、健脾、安抚人心都有显著的疗效。 茯苓多糖的提取方法主要有稀碱浸提法、酶法、发酵法、微波辅助提取法、超声波辅助提取法等 本文以茯苓为原料，采用蒸汽爆破技术对茯苓进行预处理，利用水提醇沉法提取茯苓多糖。以多糖得率为指标，利用响应面法对蒸汽爆破茯苓多糖的提取工艺进行优化，拟获得最佳的提取工艺参数，并对获得的蒸汽爆破茯苓多糖的结构进一步分析，为蒸汽爆破茯苓多糖的提取提供技术支撑。 1 材料和方法 1.1 材料和试剂 茯苓，无限极(中国)有限公司;无水乙醇、葡萄糖标准品、苯酚、浓硫酸，分析纯。 1.2 仪器、试药与仪器 101-0BS型数显电热鼓风干燥箱，广州央申科技仪器有限公司;RE-52型旋转蒸发仪，上海维普生化仪器厂;DFY-200C/200g型食品级粉碎机，浙江利闻科学仪器有限公司;N-1100型离心机，南京普析通用有限公司;UV-1601型紫外分光光度计、傅里叶变换红外光谱仪，日本岛津公司;HH-4数显电子恒温水浴锅，常州国华电器有限公司;SHZ-D循环水式多用真空泵，上海子华生物科技有限公司;KQ-80蒸汽爆破试验机，鹤壁正道启宝生物科技有限公司。 1.3 方法 1.3.1 蒸汽爆破茯苓的制备 称取茯苓粉末，调整含水率后装入蒸汽爆破装置中高温升至170℃，将处理条件设定为蒸汽爆破压力2.0 MPa、保压时间90 s，依次对蒸汽爆破压力、保压时间进行试验，蒸汽爆破后将物料干燥、粉碎，过0.25 mm筛，得蒸汽爆破茯苓粉末。 1.3.2 蒸发浓缩时间 称取蒸汽爆破茯苓粉末2 g，加入蒸馏水至固液比1∶50 (g/m L)，在80℃条件下浸提3 h，提取液过滤后水浴蒸发浓缩至10 m L，在浓缩液中加入4倍体积无水乙醇进行过夜沉淀。然后在4 000 r/min条件下离心20 min，弃上清液，沉淀物冷冻干燥得到蒸汽爆破茯苓粗多糖。 1.3.3 单因素试验 称取蒸汽爆破茯苓粉末2 g，在水提固液比1∶50 (g/m L)、水提温度80℃、水提时间90 min、水提次数3次的基础上，进行单因素试验，考察水提固液比、水提温度、水提时间、水提次数4个因素对多糖得率的影响。 1.3.4 box-behnken试验设计 根据单因素试验结果选取因素水平，建立四因素三水平的Box-Behnken试验，以蒸汽爆破茯苓多糖提取得率为响应值，试验因素及水平设计如表1所示。 1.3.5 多糖含量测定 蒸汽爆破茯苓多糖含量的测定采用苯酚-硫酸法。以葡萄糖作为标准品，在波长490 nm处测定吸光度，以吸光度(Y)为纵坐标，标准液质量浓度(X)为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程:Y=0.009 5X-0.013 5(R 式中:R为多糖得率，%;m 1.3.6 椰子糖的红外分析 称取样品粉末1 mg，混合适量已干燥的溴化钾(KBr)粉末，玛瑙研钵中研磨均匀后压片，在波数4 000～400 cm 1.4 设计分析的意义 采用Design-Expert 8.0.5软件进行设计分析。均采用Origin 9.0进行数据处理，数据统计均采用SPSS 25.0进行ANOVA单因素方差分析和Duncan多重比较分析(P0.05)。 2 结果与分析 2.1 保压时间对茯苓多糖得率的影响 蒸汽爆破压力对茯苓多糖得率的影响如图1所示:多糖得率随着蒸汽爆破压力的升高先增加后降低，在蒸汽爆破压力为1.0、1.5、2.0 MPa条件下，多糖得率显著升高，在蒸汽爆破压力为2.0 MPa时达到最大值1.01%，约为空白组的15倍。这可能是由于蒸汽爆破过程的高温高压条件会引发纤维素等大分子物质部分降解成糖类，一定程度提高了可溶性多糖含量，或者是渗入其结构内部的水蒸气在瞬时降压时导致细胞壁表面产生裂缝和微孔，促进可溶性多糖溶出 保压时间对茯苓多糖得率的影响如图2所示:多糖得率随着保压时间的增加呈先增加后下降趋势。当保压时间由10 s增加至60 s时，多糖得率从0.24%增大至1.04%，而后随着保压时间进一步增加，多糖得率开始下降，当保压时间为120 s时，多糖得率降低至0.36%。这可能是由于保压时间过长，导致纤维素过度降解成小分子还原糖或者是可溶性糖向不可溶性糖转化，从而导致多糖得率下降 2.2 单因素试验 2.2.1 提取溶剂用量对茯苓多糖得率的影响 如图3所示:固液比在1∶30～1∶50(g/m L)的范围内，多糖得率与提取溶剂用量呈正比关系，当固液比为1∶50 (g/m L)时，多糖得率最高，为0.67%。适量增加溶剂用量有利于提高茯苓多糖的溶出。因此，选择1∶50 (g/m L)为蒸汽爆破茯苓多糖的固液比。 2.2.2 提取温度对多糖得率的影响 如图4所示:提取温度