准噶尔山楂种子内源抑制物质活性研究.docxVIP

? ? 准噶尔山楂种子内源抑制物质活性研究 ? ? 如马南木·尼合买提， 聂必林， 热依汉古丽·夏迪， 巫利梅， 吕海英 (1.旱区植物逆境生物学实验室， 新疆 乌鲁木齐 830054；2.新疆特殊环境物种保护与调控生物学实验室， 乌鲁木齐 830054；3.新疆师范大学生命科学学院， 乌鲁木齐 830054) 种子休眠是植物具有的一种复杂的机制，是种子萌发和植物生长发育的重要保障[1-3]。种子休眠不仅在高等植物个体发育中起重要作用，也和种群的生存及发展息息相关[4-5]。对于植物而言，种子休眠是一种有利的生态适应特征，它会推迟种子的发芽，直到季节和生长条件对幼苗的生长有利时才会打破休眠[6-8]。但是对种子生产、人工扩散和栽培带来许多不便，影响该植物种群的更新速度[9-11]。内源抑制物质是种子休眠的主要原因之一[12]，种子的不同部位可能存在不同的内源抑制物质，这些抑制物通过不同途径阻碍种子生理活动或某个代谢环节，从而降低种子的发芽率[13-15]。种子通过分解这些化学物质来解除抑制作用进而萌发[16-17]。随着国内外对内源抑制物研究的深入，各式各样的植物内源抑制物不断被发现。朱铭玮等[18]对油用牡丹‘凤丹’种子内源抑制物研究发现，‘凤丹’种皮和种胚中含有抑制作用较强的内源抑制物，不同部位不同提取相对白菜种子发芽的影响不同。邹雨婷等[19]对绿山楂内源抑制物质成分的分析表明，绿山楂种子浸提液中的乙醚相和甲醇相对白菜种子发芽的抑制作用最强，其内源抑制物以酚类、酯类、有机酸类等为主。由此可见，不同种类植物，抑制物质在种子内的存在部位以及所含抑制物类型不同，其解除方法也不同[20-21]。因此，通过研究植物种子中内源抑制物质的类型、功能、活性和作用机理，打破种子休眠、促进种子萌发，不仅是解决植物人工繁殖和扩大资源问题的关键技术[22]，而且在农业和林业生产中也具有重要意义[23]。 准噶尔山楂(Crataegussongarica)为蔷薇科山楂属光核组唯一一种植物，也是分布于新疆伊犁部分山区的野山楂资源之一[24]，具有很强的抗旱和抗寒特性，可作为观赏树种以及栽培山楂的砧木及育种材料，利用价值高[25]。同时准噶尔山楂也是珍稀的天然花色苷类色素资源之一[26]，而且作为天山野果林的组成树种之一，是天山水源涵养林的一部分[27]，对防止水土流失、改善生态环境、维持其原生性具有重要现实意义[28]。野外调查发现，在自然环境中准噶尔山楂幼苗数量稀少，海拔在1 100～1 600 m范围内，实生苗仅为0.001 9株/m2。张侠等[29]研究表明，准噶尔山楂种子具有深度休眠特性，导致出苗率低。此外，近年来由于环境变化和人为因素的影响，已导致准噶尔山楂种群的栖息地自然资源萎缩、病害严重、群落退化和严重破坏[30]。因此，在前人研究的基础上，本研究以准噶尔山楂种子为材料，通过系统溶剂法分析准噶尔山楂种子不同部位的浸提液对白菜种子的化感作用，明确其内源抑制物的活性及分布，旨在为准噶尔山楂种子休眠破除技术及休眠机理的深入研究提供参考，为该类群植物的保护和利用提供科学依据。 1 材料与方法 1.1 材 料 供试的准噶尔山楂采自新疆霍城县大西沟，剥去果肉，洗净，阴干后-80 ℃冰箱保存备用。实验所用白菜品种为四季小白菜，种子纯度95%，净度98%，发芽率85%，含水量8%。 1.2 研究方法 1.2.1千粒重测定 随机抽取100粒山楂籽，用千分之一电子天平称量并记录，重复8次，计算其标准偏差和千粒重。 1.2.2准噶尔山楂种子不同部位甲醇浸提液的制备 对试验的山楂种子进行解剖，并将其分为三部分(种壳、种皮和种胚)。每一部分用破碎机破碎，并在33～35 ℃下干燥至恒重。取准噶尔山楂不同部位粉末40 g，分别置于250 mL锥形瓶中，加入5倍体积的80%甲醇，混匀，置于4 ℃冰箱中恒温提取。期间多次取出摇匀，充分提取，24 h后过滤，重复提取3次，将所得提取液混合，减压浓缩后定容至250 mL。 1.2.3准噶尔山楂种子不同部位内源抑制物质的初步分离 根据图1所的过程，通过系统溶剂法[31]分离种子各部分的提取物。分离出的石油醚相、乙醚相、乙酸乙酯相、甲醇相和水相提取物用旋转蒸发器蒸发和浓缩。当定容达到250 mL后，将其置于4 ℃冰箱中保存备用。 1.2.4准噶尔山楂种子不同提取相的活性测定 以白菜种子为材料，测定上述提取相的活性：白菜种子在45 ℃水浴中提前浸泡10 min，并在此期间持续搅拌。在12 cm培养皿中放置一层滤纸，分别加入各相提取液3 mL，取50粒白菜种子均匀放置于滤纸中，湿度保持在85%以上，在(23±2)℃恒温暗培养，并加入与对照组(ck)相同体积的蒸馏水，每组重复4次。48 h后，计算白菜种子的发芽率(发芽标准为