传统蝉花活体人工培养新技术.docxVIP

传统蝉花活体人工培养新技术 蝉花又名蝉草、蝉毛和胡虫，是一种中国传统中药。这是麦角菌科的一种真菌优良的蝉草。 家蚕和蚕蛹是传统的优质滋补品, 化学成分十分丰富, 家蚕的传统利用主要是白僵蚕以及蛋白质, 脂肪酸开发成各种食品及保健品 材料表面 菌株的组成和保存 实验用菌株来源及编号见表1, 其中JZD3-C, JZD3-M分别代表JZD3的孢子型和菌丝型角变分离株, 以上菌株均保存于贵州大学真菌资源研究所。 实验用培养基 感染家蚕孢子粉制备, 采用查氏+0.05%蛋白胨。实践证明该培养基上产生的孢子具有最强的致病性 家蚕的来源 实验中家蚕幼虫及蚕蛹均购自贵州省东桑西移平坝生产基地。 方法 感染绿霉的家蚕和昆虫浸泡感染法 0.05%聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸脂-80 (吐温-80) 洗下各试管内孢子, 稀释至孢子为5.0×10 含蚕蛹的蚕蛹的活化培养 采用上述方法制备孢子悬液。感染蚕蛹时, 首先用剪刀将蚕蛹剪开取出其中的蚕蛹, 然后将蚕蛹放入孢子悬液中浸泡2 min, 每10头放入一个灭菌的垫有滤纸的直径15 cm培养皿中, 湿棉球保湿, 28 ℃人工气候培养箱中培养。每天观察记录它们的感染情况。 2.根分离管理 将感染致死并已经僵化的家蚕挑出, 放入干净的罐头瓶内, 室温培养, 观察孢梗束生长情况。 结果 对家蚕的感染情况 从感染至实验后期, 幼虫发生一系列变化。感染初期, 幼虫行动迟缓, 食量减少, 约1周后开始吐丝结茧。吐丝结束后剪开蚕茧取出其中的虫体并统计被蝉拟青霉感染致死的家蚕数。被感染的幼虫虫体僵硬, 节间膜处出现白色菌丝, 见图1。统计结果显示, 蝉拟青霉对家蚕幼虫的感染率低, 被感染的虫体中有些幼虫已变成蛹, 而有些幼虫仍是幼虫阶段, 见表2。继续培养发现, 大部分菌株感染家蚕幼虫后并不产生孢梗束, 只有白色菌丝布满整个虫体。只有菌株3716长出极短的孢梗束。 孢梗束感染蚕蛹及培养蚕结果 被感染的蚕蛹行动迟缓, 5~6 d后虫体僵硬, 随后蚕蛹节间膜处开始长出白色菌丝。 不同菌株感染蚕蛹进而培养出蝉花的成 功率 (长出孢梗束的蚕蛹数量/实验蚕蛹总数30) , 见表3。 孢梗束生长情况 除菌株3716外, 蝉拟青霉感染家蚕幼虫不产生孢梗束。大部分菌株在感染蚕蛹后能产生孢梗束, 然而不同菌株感染蚕蛹后产生孢梗束数量及形状差异较大, 见图2。 对家蚕的感染情况 蝉花的研究一直受到人们的关注。近年来, 蝉花的人工培养也随着野生资源的不断减少和市场需求不断增加成为解决问题的突破口。自然基物上培养蝉花虽已取得成功, 但因为缺少虫体而未能完全代替野生蝉花。本实验已证明蝉拟青霉感染家蚕可以得到不仅产子座而且具有虫体的蝉花。 本实验选用家蚕幼虫和蚕蛹作为寄主。从感染结果得出, 蝉拟青霉对家蚕幼虫和蚕蛹都具有较强的感染力, 大部分菌株对两者的感染率达到70%以上, 其中菌株6909对蚕蛹的感染率高达100%, 菌株6903和6912也达到90%。虽然蝉拟青霉对家蚕幼虫的感染未能达到100%, 但是从整体来看, 蝉拟青霉对幼虫和蚕蛹的感染并没有太大的差异。 被感染家蚕的龄期不同导致蝉拟青霉在家蚕上产孢梗束情况差异很大。以幼虫为寄主时, 虽然蝉拟青霉对家蚕幼虫具有较高的感染率, 遗憾的是, 大部分菌株在感染幼虫后不产生孢梗束, 只有菌株3716产生极短的孢梗束, 而它感染蚕蛹后产生大量粗壮的孢梗束。引起这种差异的原因可能是幼虫和蚕蛹体内营养成分的差异, 也许幼虫体内积累的营养物质不及蚕蛹丰富, 导致蝉拟青霉只能产生菌丝而不足以产生孢梗束。 蝉拟青霉对家蚕幼虫的感染比较复杂, 被感染致死的虫体既有蚕蛹也有幼虫, 这可以从虫体的差异和菌株的差异两方面解释。作者采用的幼虫都是同一批次, 而且实验过程中也是由同一个人挑选生长状况一致的虫体, 基本保证了所有实验试虫的一致性。从结果看, 有些菌株对幼虫感染致死的虫尸都是幼虫, 如菌株1710, 4606, 3618, 6903, 6912, JZD2, JZD3, 6723;而有些菌株则不同, 如在被菌株4607感染的23头虫体中只有8头是幼虫, 在被菌株4614感染的21头虫体中只有7头是幼虫。这基本上说明导致这个结果的原因是由于蝉拟青霉不同菌株的差异。 蝉拟青霉不同菌株间的差异也体现在它们感染蚕蛹后产孢梗束情况的差异方面。尽管大部分蝉拟青霉感染蚕蛹后能产生孢梗束, 然而产生的孢梗束数量和形态都有较大的差异。即便是同一株菌株的不同分生孢子感染蚕蛹后产生的孢梗束也不尽相同, 菌株6912感染的蚕蛹能产生长达5 cm的孢梗束, 也能产生大量粗短的孢梗束, 其原因有待进一步探讨。 总之, 家蚕培养蝉花是可行的, 蚕蛹培养蝉花产孢梗束优于幼虫。并且, 不同的蝉拟青霉菌株对家蚕的感染率和产孢梗束情况差异较大