阿司匹林对sd大鼠小肠组织ss、egfr、pge2及黏液影响的研究.docxVIP

阿司匹林对sd大鼠小肠组织ss、egfr、pge2及黏液影响的研究 近年来，随着我国医疗卫生的发展，人均期望寿命显著延长，人口构成的老龄化、高血压、冠状动脉粥样硬化和风湿性疾病的患者数量日益增加。冠状动脉粥样硬化（如阿司匹林）常被用作临床应用。这种药物不仅有治疗作用，而且还有一些副作用。长期以来，人们更加重视由胃肠和十二指肠引起的损害，但通过肠镜的普及，发现nsag的肠副作用非常低。最近研究表明服用NSAIDs的患者中有50%出现小肠黏膜破坏 1 材料和方法 1.1 实验分组、分组 实验动物为成年健康SD大鼠 (重庆医科大动物实验室) 32只, 雌雄各半, 体重 (198.59±18.83) g, 各组间在性别、年龄、体重上无显著差别, 饲养标准棒状饲料, 自由饮水, 室温 (23±2) ℃, 12 h昼夜交替光照, 实验前适应性喂养1周。随机分为四组, Ⅰ组 (灌胃组) 8只, 精氨酸阿司匹林注射液灌胃;Ⅱ组 (灌肠组) 8只, 精氨酸阿司匹林注射液灌肠;Ⅲ组 (腹腔注射组) 8只, 腹腔注射精氨酸阿司匹林注射液;以上三组精氨酸阿司匹林注射液 (海南灵康制药有限公司, 产品批号100601) 用量为100 mg/kg, 每天2次;Ⅳ组8只不采取任何干预措施, 自由饮水, 饮食, 饲养2周后断颈处死实验动物后留取距回盲瓣5 cm的回肠组织保存于-80℃备用。 1.2 对肠粘膜损伤的评估 采用Chiu氏6级评分法 1.3 阿利辛蓝染色 试剂配制:3%醋酸溶液:冰醋酸3 ml+蒸馏水97 ml。阿利辛蓝溶液 (p H2.5) :阿利辛蓝1 g+3%醋酸100ml。0.1%核固红溶液:核固红0.1 g+硫酸铝5 g+蒸馏水100 ml, 硫酸铝溶于水中, 加核固红, 慢慢加热到沸腾并把它冷却过滤, 并添加一粒百里香酚作为防腐剂。取石蜡包埋的各组动物末段回肠组织, 切片、脱蜡至水, 阿利辛蓝着色30 min, 自来水冲洗。0.1%核固红溶液复染核5 min, 自来水冲洗, 脱水, 封片, 显微镜观察。采用Image Pro plus图像分析软件进行半定量分析, 每个样本随机检测5个染色较好的高倍视野 (×400) , 计算黏液的阳性面积及积分光密度 (IOD) , 得出5个高倍视野的均数, 即代表该样本黏膜表面及杯状细胞中的黏液IOD值。 1.4 离心液、离心液、无定形液制备 取上述回肠组织100 mg, 剪碎为3 mm×3 mm大小, 加入1ml PBS液, 低温匀浆, 放入1.5 ml离心管, 离心1 000 r/min, 4℃, 5 min, 取上清液分装待用。按试剂盒 (活乐生物有限公司, 上海) 说明书操作。 1.5 免疫组织化学检测检测细胞因子 取石蜡包埋的各组动物末段回肠组织切片, 脱水后行免疫组化染色。免疫组化一抗分别为:1∶200兔抗鼠SST单克隆抗体, 兔抗鼠EGFR单克隆抗体, 兔抗鼠PGE2单克隆抗体;二抗试剂盒, SP免疫组化检测试剂盒及DAB显示液, 以上试剂均来自博奥森公司 (北京, 中国) 。切片经脱蜡至水, 修复抗原、一抗、二抗程序作用后, 加入酶标链霉卵白素复合物, DAB室温显色, 苏木素复染, 脱水, 封片, 显微镜观察。以细胞质及细胞膜染为棕黄色为阳性细胞。采用Image Pro plus图像分析软件进行半定量分析, 每个样本随机检测5个染色较好的高倍视野 (×400) , 计算阳性细胞IOD值, 得出5个高倍视野的均数, 即代表该样本阳性细胞IOD值。 1.6 统计方法 用SPSS20统计软件进行四组间秩和检验及Dunnett t检验, 差异显著性水平设定为P0.05。 2 结果 3 不同给药途径对小鼠肠黏膜流变学及病理生理的影响 NSAIDs相关性肠病中典型的病理改变为小肠黏膜炎症、糜烂、溃疡、黏膜下层纤维增生, 引起肠腔狭窄等 人类胃、小肠黏膜含有丰富的PGE2, 它是小肠黏膜重要的保护因素。PGE2具有广泛的生物活性, 在抑制胃酸分泌, 保护黏膜细胞等方面有着重要的作用。PGE2具有直接的血管扩张作用, 增加肠道黏膜的血流量;在组织炎症时, 通过抑制炎症细胞的黏附、抑制炎性细胞因子介导的细胞损伤等途径, 发挥其对黏膜细胞的保护作用。NSAIDs对胃、肠黏膜中PGE2的影响是早已明确的。NSAIDs可以通过以下几方面引起小肠的损害 小肠上皮主要由吸收细胞、杯状细胞和少量的内分泌细胞构成。杯状细胞散在吸收细胞之间, 其主要功能是分泌黏液, 在吸收细胞表面形成一层黏液层。小肠黏膜的完整性和其表面的黏液层是小肠重要的物理、生物和化学屏障, 避免肠腔内有害物质的侵入。而黏液量的多少与阿利辛蓝染色的IOD值和厚度成正相关。灌胃组、灌肠组、腹腔注射组阿利辛蓝染色面积及IOD值比正常组都低。提示阿司