NYT 1372-2007饲料中三聚氰胺的测定.pdf

ICS 65.120B 46NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 1372--2007饲料中三聚氰胺的测定Determination of Melamine in Feeds2007-06-14实施2007-06-14 发布中华人民共和国农业部发布 NY/T 1372-2007前言本标准参考美国食品药品管理局(FDA)实验室方法和国内相关实验室的方法，提出了饲料中三聚氰胺的测定方法。本标准的附录 A为资料性附录。本标准由农业部畜牧业司提出。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：国家饲料质量监督检验中心（北京）。本标准起草人：赵根龙、王培龙、宋荣、索德成、马东霞、张苏、李丽蓓、杨曙明、苏晓鸥。I NY/T 1372—2007饲料中三聚氰胺的测定1 范围本标准规定了测定饲料中三聚氰胺的含量的高效液相色谱法(HPLC)和气相色谱质谱联用法(GCMS),其中 GC-MS法为确证法。本标准适用于配合饲料、浓缩饲料、添加剂预混合饲料、植物性蛋白饲料、宠物饲料（干粮、罐头）中三聚氰胺的测定。本标准中 HPLC法最低定量限为2.0mg/kg,GC-MS 法最低定量限为0.05mg/kg。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件,其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准。GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T20195动物饲料试样的制备3 HPLC 法3.1原理试样中的三聚氰胺用三氯乙酸溶液提取，提取液离心后经混合型阳离子交换固相萃取柱净化，洗脱物吹干后用甲醇溶液溶解，用高效液相色谱仪进行测定。3.2试剂与材料除非另有规定，仅使用分析纯试剂和符合GB/T6682的三级水,色谱用水符合GB/T 6682一级水的规定。3.2.1甲醇:色谱纯。3.2.2乙腈：色谱纯。3.2.3氨水:浓度25%～28%。3.2.4混合型阳离子交换固相萃取柱：60mg,3mL。3.2.5三氯乙酸溶液10g/L:称取10g三氯乙酸加水至1000mL。3.2.6多氨水甲醇溶液:量取 5mL氨水,溶解于 100 mL甲醇中。3.2.72乙酸铅溶液22g/L：取22g乙酸铅用约300mL水溶解后定容至1L。3.2.8滤膜:0.45μm,有机相。3.2.9甲醇溶液:200mL甲醇(3.2.1)加入800mL一级水,混匀。3.2.10流动相：称取2.02g庚烷磺酸钠和2.10g柠檬酸于1L容量瓶中，用水溶解并稀释至刻度。取该溶液 900 mL加人100 mL乙腈(3.2.2)。3.2.11三聚氰胺标准品（纯度99%）。3.2.12三聚氰胺标准溶液标准储备液：称取100mg(精确到0.1mg)的三聚氰胺标准品，用甲醇溶液(3.2.9)溶解并定容于100mL容量瓶中,该溶液浓度为1mg/mL,于 4℃冰箱内贮存,有效期3个月。1 NY/T 1372—200标准中间液：吸取标准储备液5.00mL，于50mL容量瓶内，用甲醇溶液(3.2.9)定容至50mL,该溶液三聚氰胺浓度为 100 μg/mL,于4℃冰箱内贮存,有效期1个月。标准工作液:用移液管分别移取标准中间液1mL、5mL、10mL、25mL、50mL于5个100 mL容量瓶内，用甲醇溶液（3.2.9)定容,该溶液三聚氰胺浓度为1.0 μg/mL、5.0 μg/mL、10 μg/mL、25 μug/mL、50 μg/mL。于 4℃冰箱内贮存,有效期1 周。3.3仪器与设备3.3.1高效液相色谱仪，配有二极管阵列检测器或紫外检测器。3.3.2 离心机:10000r/mino3.3.3涡旋混合器。3.3.4超声波清洗器。3.3.5盒氮吹仪,可控温至60℃。3.3.6固相萃取装置。3.3.7高速匀质器。3.3.8索式提取器。3.3.9震荡摇床。3.4试样制备按照GB/T20195的规定制备试样。3.5测定步骤3.5.1提取配合饲料、浓缩饲料、添加剂预混合饲料、植物性蛋白饲料和宠物饲料（干粮)中三聚氰胺的提取。称取5g试样(精确至0.01g),准确加人50mL三氯乙酸溶液（3.2.5),加2mL乙酸铅溶液(3.2.7)。摇匀,超声提取20 min。静止2min,取上层提取液约30 mL转人离心管,在10 000 r/min离心机上离心5min。宠物饲料(罐头)中三聚氰胺的提取。称取5g试样（精确至0.01g）,加入50mL乙醚,摇床上120r/min 振荡 1h,弃去乙醚,再加人 50 mL 乙醚,摇床上120r/min 振荡 1 h,弃去乙醚,其余步骤同.3.5.2净化分别用3mL 甲醇,3mL水活化混合型阳离子交换