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木蝴蝶配方颗粒中木蝴蝶苷b和黄芩苷的含量测定 木槿是紫穗科植物的木槿或偶氮（l.）和泰康的干燥成熟种子。它首先被记录在云南南部的草本植物上，原名数千张纸。《本草纲目》最初被称为木槿。它又甜又甜，具有润肺、咽喉、疏肝、胃的作用。木蝴蝶的化学成分以黄酮及其苷类为主, 黄酮苷类主要有木蝴蝶苷A、木蝴蝶苷B、黄芩苷等活性成分。2010年版《中国药典》一部收载了木蝴蝶苷B的质量分数测定, 文献中多以黄芩苷的质量分数为指标对木蝴蝶进行质量评价;文献报道采用HPLC法测定了木蝴蝶提取物中木蝴蝶苷A的质量分数;文献报道了HPLC法测定木蝴蝶药材中黄芩素和白杨黄素的质量分数;另有HPLC法测定木蝴蝶药材中木蝴蝶苷A和木蝴蝶苷B质量分数的报道, 而对木蝴蝶配方颗粒的研究则较少。 木蝴蝶配方颗粒是木蝴蝶饮片经水提取后制粒而成, 供临床调配组成复方汤剂使用, 具有免煎易服、水冲即溶、携带方便、剂量准确等特点。目前6家试点生产企业对木蝴蝶配方颗粒的质量控制仅限于性状和鉴别, 并没有建立其有效成分的含量控制方法。本文在参考文献[13-14]的基础上, 采用HPLC法同时测定木蝴蝶配方颗粒中木蝴蝶苷B和黄芩苷的质量分数, 为木蝴蝶配方颗粒质量标准的建立提供参考。 1 仪器和试剂盒 1.1 紫外分离器 Agilent 1260高效液相色谱仪 (G1311C泵, G1314B紫外检测器, Chemstation工作站) ;BS110S万分之一天平 (德国赛多利斯公司) ;ABT220-5DM十万分之一电子天平 (德国KERN公司) ;CQ-25-6超声波清洗器 (上海音波声电科技公司) 。 1.2 日性酰精、木1. 木蝴蝶苷B (批号:111915-201202) 、黄芩苷 (批号:110715-201117, 质量分数以91.7%计) , 均购自中国食品药品检定研究院;麦芽糊精 (河南鑫源食品有限公司, 批号:F1207005) ;木蝴蝶配方颗粒 (广东一方制药有限公司, 批号:1107143、1111055、1211151) ;甲醇、乙腈为色谱纯, 水为超纯水, 其他试剂均为分析纯。 2 方法和结果 2.1 流动相及洗脱溶液 色谱柱:Venusil ASB C18柱 (250 mm×4.6mm, 5μm) ;流动相:A为甲醇, B为乙腈, C为0.3% (体积分数, 下同) H3PO4溶液, 按表1程序进行梯度洗脱;检测波长:280 nm, 流速:0.8 m L/min, 柱温:30℃。 2.2 对照品溶液的制备 精密称取木蝴蝶苷B对照品12.54 mg, 置200m L容量瓶中, 加50%甲醇溶解并稀释至刻度, 摇匀即得每1 m L含62.7μg的木蝴蝶苷B对照品溶液;精密称取黄芩苷 (质量分数为91.7%) 对照品11.74mg, 置250 m L容量瓶中, 加甲醇溶解并稀释至刻度, 摇匀即得每1 m L含43.062 32μg的黄芩苷对照品溶液。 2.3 超声减失 取木蝴蝶配方颗粒适量, 研细, 取约0.1 g, 精密称定, 置具塞锥形瓶中, 精密加入70% (体积分数, 下同) 甲醇50 m L, 密塞, 称定质量, 超声处理 (功率200 W, 频率25 k Hz) 30 min, 放冷, 再称定质量, 用70%甲醇补足减失的质量, 摇匀, 滤过。取续滤液, 即得。 2.4 阴性样品溶液的制备 取麦芽糊精约0.1 g, 精密称定, 置具塞锥形瓶中, 精密加入70%甲醇50 m L, 同“2.3”项下方法制成阴性样品溶液。 2.5 色谱条件测定 分别精密吸取木蝴蝶苷B对照品、黄芩苷对照品、阴性样品溶液及木蝴蝶配方颗粒供试品溶液各10μL, 分别按“2.1”项下色谱条件测定, 结果理论板数按木蝴蝶苷B峰计算应不低于2 000, 阴性样品无干扰, 见图1。 2.6 木蝶苷b和麻黄苷a回归方程 分别精密吸取木蝴蝶苷B、黄芩苷对照品溶液1、2、4、8、12、16、20μL, 分别按“2.1”项下色谱条件测定, 记录峰面积, 以对照品进样量为横坐标 (X) 、峰面积为纵坐标 (Y) 进行回归处理。得木蝴蝶苷B和黄芩苷的回归方程分别为Y=1.991×103X+5.875 (r=0.999 5) ;Y=3.331×103X+1.264 (r=0.999 7) 。表明木蝴蝶苷B进样量在0.062 7~1.254 0μg、黄芩苷进样量在0.043 1~0.861 2μg呈良好线性关系。 2.7 测定木聚糖酸峰面积 取同一批木蝴蝶配方颗粒供试品溶液 (批号:1211151) , 按“2.1”项下色谱条件重复测定6次, 分别记录木蝴蝶苷B和黄芩苷峰面积。结果木蝴蝶苷B峰面积的RSD值为0.16%, 黄芩苷峰面积的RSD值为0.10%, 表明仪器精密度较好。 2.8 测