浅谈使用克伦特罗试剂盒检测饲料中克伦特罗的含量.docxVIP

浅谈使用克伦特罗试剂盒检测饲料中克伦特罗的含量 克伦特罗是一种镇痛药。近年来，非法添加到饲料中用于提高脂肪性动物的瘦肉率，加速动物的生长。由于其添加量是治疗剂量的5.10倍，动物体内残留量很大，这将给消费者带来损害。目前克伦特罗检测方法有液相色谱法 (LC) , 气相色谱质谱法 (GC-MS) , 液相色谱串联质谱法 (LC-MS) 等。但这些检测方法操作复杂、成本较高, 而筛选法是实施检测的第一步, 用于大量样品的高通量分析, 目的是检测某种或某类危害物是否存在, 它简单快速。筛选法基于许多原理, 但目前应用最多的是酶联免疫吸附法 (简称ELISA法) , 该检测方法敏感性高、特异性强、重复性好, 具有操作简便、分析速度快、灵敏度高、样品容量大、样品前处理简单、仪器化成本低和分析成本低等优点, 是目前最理想的残留筛选性分析方法之一。由于“瘦肉精”中毒事件和出口水产品氯霉素风波, 使得ELISA法在我国畜产品安全检测中得到了广泛应用。 1 克伦特罗的含量 试剂盒采用间接竞争ELISA方法, 在酶标板的微孔条上预包被偶联抗原, 当样品加入到各个微孔中后, 样品中残留的克伦特罗和微孔条上预包被的偶联抗原竞争抗克伦特罗抗体, 加入酶标二抗后, 用TMB底物显色, 样本吸光值与其残留物克伦特罗的含量成负相关, 与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数, 即可得出样品中克伦特罗的含量。 2 不含污染物饲料的粉碎 饲料样品抽取后, 应严格按照饲料样品分装和粉碎的规定进行分装、粉碎, 避免不同饲料样品相互污染。将样品袋中的饲料样品充分摇匀后, 用洁净的样品称量勺进行取样, 要注意的是, 每取完一个样品时都必须要将称量勺擦干净。 3 交叉反应率测定 目前酶联免疫法检测用试剂盒种类繁多, 如何选择既能满足检测要求又价格低廉的试剂盒是一个问题。本人根据使用这些试剂盒, 在实际检测中发现, 一般在试剂盒说明书中列出以下指标:最低检测限;回收率;交叉反应率;标准曲线图谱及数据, 标准曲线至少由5个浓度组成;IC50测定值及变形曲线点数目, 是比较规范的试剂盒, 可以选择。 4 温度稳定 试剂盒通常是在2～8℃的条件下保存, 不能冷冻, 使用前将试剂盒从冰箱中取出于室温条件下回温, 待回温至室温后方可使用, 试剂盒在室温条件下放置时间最好不要超过24h, 所以应将没有使用完的试剂盒及时地放回冰箱中保存, 将不用的酶标板微孔条放进自封袋重新密封。标准物质和无色的发色剂对光敏感, 因此要避免直接暴露在光线下。另外, 一般试剂盒的有效期为12个月, 不要使用过了有效日期的试剂盒, 也不要使用过了有效期的试剂盒中的任何试剂, 掺杂使用过了有效期的试剂盒会导致灵敏度的降低, 同样地, 不要交换使用不同批号试剂盒中的试剂。 5 应在测试试剂盒时考虑以避免的问题 5.1 回温和回温时回温 5.1.1室温及试剂盒的温度条件。室温最好在25℃左右, 试剂盒应提前从冰箱中取出于室温条件下回温, 待回温至室温后方可使用。若室温低于20℃或试剂及样本没有回到室温 (20～25℃) 会导致所有标准的吸光值 (OD值) 偏低。 5.1.2恒温箱的温度条件。操作前应先打开恒温箱, 并设置好所需温度, 待避光孵育前检查恒温箱的温度是否达到所需温度。 5.2 吸头操作时吸头注意事项 先加标准品或样本置相对应的微孔中, 注意每加一个标准品或样本必须更换吸头;再加入后面的各试剂时, 吸头不能靠在板孔壁上, 要悬空加入, 以防止交叉污染;吸取各试剂或样本时, 要防止少加、漏加的现象而影响测定结果。 5.3 液压吸头的加入 无洗板机时建议使用多孔加样器, 观察吸头是否安装牢固, 以确保每孔加入的洗涤工作液相同;同样地, 加洗涤液时吸头不能靠在板孔壁上, 要悬空加入, 以防止交叉污染;不要漏洗板孔。整个操作过程不要让板孔干燥, 洗板后应立即进行下一步操作, 不要中断实验去从事其他事情, 因为在洗板过程中如果板孔干燥则会出现标准曲线不成线性、重复性不好的现象, 所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。此步的操作关系到测定结果的准确度和重复性。 5.4 .注意克伦特罗的检测 在显色反应过程中, 由于板孔中含有两种或两种以上试剂, 所以加样完成后需在桌上做圆周运动以混匀, 混匀时要注意防止孔内的液体溅出。在加入底物液A和底物液B后, 显色了规定的时间后, 若颜色较浅, 可以适当地延长显色反应时间, 但延长时间不得过长, 一般不超过10min。 畜产品的质量安全与我们人类的健康息息相关, 国家食品安全监督管理部门、国家农业部以及饲料办等部门都相继颁布了相关的法律法规和相关的检测方法, 使得动物用饲料中的克伦特罗含量得到了有效的控制。本文就使用试剂盒通过酶联免疫吸附试验方法测定饲料中克伦特罗含量的实验操作过程中