左金丸组分中药配伍组分制备工艺研究.docxVIP

? ? 左金丸组分中药配伍组分制备工艺研究 ? ? 刘斯琪，王如峰 左金丸组分中药配伍组分制备工艺研究 刘斯琪，王如峰* 北京中医药大学生命科学学院，北京 102488 建立左金丸组分中药配伍组分制备工艺并对所得组分的主要成分进行定性和定量表征。通过正交试验设计考察最佳提取溶剂、提取时间和提取次数；以总生物碱含量为指标考察吸附树脂类型、最佳上样质量浓度、上样量、径高比和吸附时间；采用超高效液相色谱-串联质谱法（UPLC-MS/MS）和UPLC法对组分中的主要成分进行定性和定量分析。所选工艺流程为10倍量70%乙醇回流提取2次，每次1 h；提取物用AB-8大孔树脂柱纯化，最佳上样质量浓度为0.5 g/mL，上样量为0.12个柱体积（BV），径高比为1∶12，吸附时间为1 h；洗脱溶剂依次为28 BV 40%乙醇，16 BV 60%乙醇，13 BV 95%乙醇。上述工艺流程得到3个组分，即C40、C60和C95组分。从C40组分中指认了31个成分，主要为黄连生物碱类，其中盐酸小檗碱含量最高（20.15%）；从C60组分中指认了32个成分，主要为吴茱萸柠檬苦素类，其中柠檬苦素含量最高（15.40%）；从C95组分指认了36个成分，主要为吴茱萸生物碱类，其中吴茱萸次碱含量最高（4.14%）。建立的左金丸组分中药配伍组分制备工艺重复性好，所得组分活性成分含量高，质量稳定，为进一步成药性研究和组分中药研制奠定基础。 左金丸；黄连；吴茱萸；组分中药；UPLC-MS/MS；生物碱；盐酸小檗碱；柠檬苦素；吴茱萸次碱 左金丸为中医经典名方，记载于《丹溪心法·火六》卷一，由黄连和吴茱萸以6∶1比例配伍而成。方中黄连解除肝火旺盛，配以吴茱萸调和药性，两者合降胃气，对胃炎、胃溃疡疗效显著。左金丸的主要活性成分为生物碱类成分[1]，左金丸总生物碱有治疗胃溃疡的作用[2]。其中，来自黄连的生物碱为异喹啉类，包括小檗碱、表小檗碱、黄连碱、药根碱等，有消炎、抗菌、抗病毒、抗癌等多种生物活性[3]；来自吴茱萸的生物碱包括吲哚类和喹诺酮类成分，有抗菌[4]、抗炎、保护心血管等作用[5-6]。除此之外，左金丸还含有来自吴茱萸的柠檬苦素类成分[7]。 左金丸化学成分相对明确，通过对主成分生物碱类进行富集除杂有望开发成组分中药。组分中药是在中医药理论指导下，遵循方剂配伍原则，采用现代药物开发方法和技术研制而成的现代中药[8]。组分中药的物质基础和作用机制相对清楚，不仅保留了中药方剂的优势，而且便于制剂，能实现工业化大规模重复制备并易于质量控制，是中药现代化的重要体现形式[9]。为了给后续左金丸主要组分的成药性研究提供参考，本研究建立了左金丸总生物碱组分的高效制备工艺，并对获得的配伍组分主要成分进行了定性定量表征，为左金丸的进一步开发利用奠定基础。 1 仪器与材料 1.1 仪器 LC-30AD型超高效液相色谱仪，日本Shimadzhu公司；UPLC-QExactive-MS型超高效液相色谱串联质谱仪，美国Thermo公司；Shim-pack GIST C18色谱柱（100 mm×2.1 mm，2 μm），日本Shimadzhu公司。 1.2 材料 黄连饮片（产地重庆石柱，批号Ⅲ YSZ-YC01）、吴茱萸饮片（产地江西九江，批号WZYCJJ-YC01）由北京盈科瑞创新医药股份有限公司提供，经北京中医药大学王如峰教授鉴定为毛茛科黄连属植物黄连Franch.的干燥根茎和芸香科吴茱萸属植物疏毛吴茱萸(Juss.) Benth. var.(Dode) Huang的干燥近成熟果实；AB-8型大孔树脂购自高华伟业食品添加剂有限公司；D151型弱酸性阳离子交换树脂购自郑州和成新材料科技有限公司；95%乙醇购自北京虹湖联合化工产品有限公司；分析纯甲酸和色谱纯乙腈、甲醇为Thermo Fisher Scientific公司。对照品格兰地新（批号M08D8S50327）、黄连碱（批号P05M9F55053）、药根碱（批号Z11M8S35794）、掌叶防己碱（批号W15J9Z52995）、盐酸小檗碱（批号Y18N8S48598）由上海源叶生物科技有限公司提供；对照品去氢吴茱萸碱（批号PRF9121743）、吴茱萸碱（批号PRF9121741）、吴茱萸次碱（批号PRF9121742）、吴茱萸苦素（批号PRF8082221）购自成都普瑞法科技开发有限公司；对照品非洲防己碱（批号RFS- F02902003011）、氧化小檗碱（批号RFS-021）、四氢小檗碱（批号RFS-S08901905023）、柠檬苦素（批号RFS-N00611812016）购自成都瑞芬思生物科技有限公司；对照品7β-羟基吴茱萸次碱（批号ML-01047）购自