中草药抗超氧自由基的研究进展.docxVIP

中草药抗超氧自由基的研究进展 自由基对人体可引起身体氧化、损伤细胞、身体衰老和各种疾病。自由基是一种外层轨道含有未配对电子的特殊状态分子或原子团,其中超氧自由基(O-2·)与人体最为密切。一些物质,如超氧化物歧化酶(SOD)、维生素C、维生素E、胡萝卜素等能清除人体的自由基。但体内的O-2·浓度随年龄的增长而增加,自由基清除能力则随年龄的增加而减少,有时不能提供足够的量来消除O-2·。因此研究和寻找外源性O-2·清除剂在人体保健、治病方面具有重要意义,从天然动植物,尤其是从具有悠久历史的中草药中寻找高效的超氧自由基清除剂,已引起了国内外学者的极大兴趣。 分子氧在单电子还原时有超氧阴离子自由基O-2·中间体生成。O-2·既可作为电子的给予体,又可接受电子,在体内可通过电子转移反应衍生出其它活性氧。从研究的角度来说,获得O-2·大体有多种方法。本文采用化学法产生O-2·,且对比了邻苯三酚、亚甲基兰、二甲基亚砜生成O-2·的效率。 中草药含有多种能够清除自由基的化合物,其抗氧化成分可归纳为6大类:黄酮类、苯酚类、皂苷类、鞣质类、生物碱类和其他类。近年来对中药抗自由基作用的研究多采用电子自旋共振、化学发生等方法,用电化学方法研究中药对超氧自由基的清除作用报道较少。但是后者也有其优势所在,所用仪器简单,操作简单,成本低,相对于化学发光法,不受到溶液颜色和惰性杂质的影响。本文利用电化学分析方法,研究了几种中草药对超氧自由基的清除作用,对推动进一步研究中草药在延缓机体衰老方面将发挥有利作用。 1 仪器、试药与仪器 JP-303型极谱分析仪(成都分析仪器厂);滴汞电极、饱和甘汞电极和铂电极组成的三电极系统;电子天平(AL104,梅特勒-托利多仪器有限公司);PHS-3C型酸度计(萧山市分析仪器厂)。 邻苯三酚(宜兴兴隆化工有限公司),三羟甲基氨基甲烷(上海山浦化工有限公司)。 其余试剂均为国产分析纯,实验用水均为二次蒸馏水。 红花、何首乌、当归、苡米、白芷、丹参、黄芩、茯苓8种中草药购于药材公司,经检验均为正品。 2 方法和结果 2.1 超氧自由基化学产生体系的比较 2.1.1 nh3-nh4cl缓冲溶液的制备 邻苯三酚、亚甲基兰和二甲基亚砜均能发生自氧化反应产生超氧自由基阴离子,研究了三者产生超氧自由基阴离子的效率。 分别制取0.2 mmol/L邻苯三酚溶液、1 mg/ml亚甲基兰溶液、3.5 mg/ml二甲基亚砜溶液、0.2 mol/L三羟甲基氨基甲烷溶液、pH=9.0的NH3-NH4Cl缓冲溶液。 在25.0 ml的0.2 mol/L三羟甲基氨基甲烷溶液中加入5.0 ml的0.1 mol/L盐酸,稀释至100 ml,得到pH=9.0的缓冲溶液。取10.0 ml为底液,加入1.0 ml的0.2 mmol/L邻苯三酚溶液,再加2.00 ml蒸馏水。采用线性扫描法记录二阶导数极谱波。 移取10.0 ml pH=9.0的NH3-NH4Cl缓冲溶液,加入1.0 ml的3.5 mg/ml二甲基亚砜溶液,再加2.0 ml蒸馏水。采用线性扫描法记录二阶导数极谱波。 移取10.0 ml pH=9.0的NH3-NH4Cl缓冲溶液,加入1.0 ml的1 mg/ml亚甲基兰溶液,再加2.0 ml蒸馏水。采用线性扫描法记录二阶导数极谱波。 2.1.2 氧自由基化合物的检测和分类 在pH=9.0的HC1-Tris缓冲溶液中,邻苯三酚可发生自氧化反应产生超氧自由基阴离子,在-0.676 V处有一还原峰,此峰为检测对象,它先逐渐增高,到一定时间后又缓慢降低。峰高随时间的变化如图所示。此峰在4.0 min处最高,且变化较小,记录该峰在此时间点的峰高值作为空白对照读数。 在pH=9.0的NH3-NH4Cl缓冲溶液中,二甲基亚砜和亚甲基兰均可发生自氧化反应产生超氧自由基阴离子,两者分别在-0.700 V、-0.682 V处有一还原峰,峰形均它先逐渐增高,到一定时间后又缓慢降低。峰高随时间的变化如图1所示。二甲基亚砜在4.0 min处最高,且变化较小;亚甲基兰在3.0 min处最高,且变化较小。分别取此峰高最大处的时间点作为分析点,记录峰高值作为空白对照读数。 图1中3条曲线从上到下分别为邻苯三酚、二甲基亚砜、亚甲基兰的峰电流和时间的关系,邻苯三酚、二甲基亚砜、亚甲基兰3种试剂在碱性条件下,在-0.68 V左右均能产生超氧自由基,但邻苯三酚产生超氧自由基的效果比另外两种试剂的效果要好的多。因此在测定8种中草药清除超氧自由基作用的实验中,产生超氧自由基采用邻苯三酚自氧化法。 2.2 当归等四种中药均可去除超氧自由基 2.2.1 极谱峰电流的测定—实验方法 将中药粉碎,每种各称取5 g,以1∶1的甲醇-水为溶剂,在回流装置中回流3 h左右,将溶液过滤,滤渣再回流2次,几次回流滤