偶氮氯膦与壳聚糖的相互作用.docxVIP

偶氮氯膦与壳聚糖的相互作用 地壳聚糖（cts）是甲基物质氮脱离酶的产物。这是自然界唯一不必要的碱性糖。它具有很好的吸附性、成膜性、通透性、成纤性、吸湿性、保湿性。因此,壳聚糖在纺织印染、造纸、食品、化妆品、污水处理、医用材料等工业中有着很广泛的应用。同时,壳聚糖及其衍生物还是很重要的生物活性物质,具有抗肿瘤、抗凝血、抗血栓、降血脂和增强免疫力等功能。此外,壳聚糖在分析化学的应用也很广泛。所以建立测定壳聚糖的方法就显得特别重要。已有利用茜素红S,锌试剂等光度法测定壳聚糖的报道,但采用电化学法测定壳聚糖的报道甚少。文中利用壳聚糖与偶氮氯膦Ⅲ生成非电活性复合物这一特征,建立了测定壳聚糖的电化学方法。 1 试验部分 1.1 工作电极的制备 JP-303型极谱分析仪(成都仪器厂);三电极系统:滴汞电极为工作电极,饱和甘汞电极(SCE)为参比电极,铂丝为对电极;CV-50W电化学分析仪(美国BAS公司);JM-1型悬汞电极(江苏电分析仪器厂)为工作电极;pHS-25型酸度计(上海雷磁仪器厂);UV-2501紫外可见分光光度计 (日本,岛津公司)。 壳聚糖(CTS,脱乙酸度85%,相对分子质量以5×105计,Sigma公司):1 000 mg/L。称取壳聚糖0.100 g溶于100 mL质量分数1% HAC溶液作为贮液,移取贮液12.5 mL定容至250 mL作为工作液(50 mg/L)。偶氮氯膦Ⅲ,5.0×10-4mol/L。六次甲基四胺缓冲液,1.0 mol/L。所用试剂均为分析纯,实验用水为3次蒸馏水。 1.2 电化学和光谱分析 在10 mL的比色管中,依次加入2.0 mL 1.0 mol/L pH 5.0六次甲基四胺缓冲液、2.0 mL 5.0×10-4mol/L偶氮氯膦Ⅲ和不同浓度的CTS,用水定容,摇匀后静置5 min用电化学方法和光谱法进行研究和测定。 2 结果与讨论 2.1 偶氮氯膦与cts发生的反应 在pH为5.0的六次甲基四胺缓冲液中,偶氮氯膦Ⅲ在574 nm处有一吸收峰,当向溶液中加入CTS后,该处的吸收峰明显降低(见图1),这表明偶氮氯膦Ⅲ与CTS发生了反应生成了复合物,因而引起了吸收峰的降低。 2.2 cts含量的测定 在pH 5.0的六次甲基四胺缓冲液中,用线性扫描二阶导数极谱法对体系进行测定,偶氮氯膦Ⅲ在-0.158V处和-0.404V处分别有2个灵敏的二阶导数还原极谱波(见图2),加入一定量的CTS后,2处的峰电位均保持不变,-0.404V处的还原波的峰电流变化不明显,而-0.158V处还原波的峰电流却明显降低,并且峰电流的降低值与加入的CTS量在一定范围内呈线性关系,因此可用于CTS含量的测定。 2.3 ph值对峰电流的影响 固定偶氮氯膦Ⅲ和CTS的浓度,实验了邻苯二甲酸氢钾、B-R缓冲液、HAc-NaAc、六次甲基四胺等缓冲液,发现在六次甲基四胺缓冲液中波形良好,峰电流稳定,并且峰降明显,同时测定了pH值的变化对峰电流的影响,结果表明,随着pH增大峰电位负移,在pH 5.0时峰电流降低值△ip最大(见图3),所以本实验采用pH 5.0的六次甲基四胺缓冲液控制体系的酸度。 2.4 不同缓冲液对峰电流降低值的影响 固定偶氮氯膦Ⅲ和CTS的量,改变缓冲液的用量。结果表明,当缓冲液取2.0 mL时,峰电流降低值△ip最大(见图4)。所以选pH 5.0的六次甲基四胺缓冲液2.0 mL为最佳用量。 2.5 偶氮氯膦浓度 在pH 5.0的六次甲基四胺缓冲介质中,固定CTS的浓度为7.5 mg/L,考察偶氮氯膦Ⅲ浓度变化对测定影响,发现当偶氮氯膦Ⅲ浓度较大时峰电流不会降低反而增大,影响测定。当偶氮氯膦Ⅲ浓度为1.0×10-4mol/L时,峰电流稳定且峰电流差值△ip最大(见图5),所以本实验选择偶氮氯膦Ⅲ的最佳用量为1.0×10-4mol/L。 2.6 稳定实验 实验表明,反应5 min后体系的峰电流稳定,并至少可稳定1 h以上。本实验选取反应时间为5 min。 2.7 标准曲线及检出限 在选定的最佳条件下,测CTS的线性范围为2.5～30 mg/L,回归方程为: ip(nA)=-193.1+62.40CCTS(mg/L),检出限为0.5 mg/L,对7.5 mg/L的CTS溶液平行进行11次测定,其相对标准偏差为2.8%。 2.8 峰电流及峰电流 在反应体系中(1.0×10-4mol/L偶氮氯膦Ⅲ+7.5 mg/LCTS):添加不同试剂考察峰电流的变化。牛血清白蛋白(BSA)(7.5 mg/L)对体系无影响,低浓度NaCl(质量分数0.1%)对体系影响不大,而较高浓度的NaCl(质量分数1.0%)和十二烷基苯磺酸钠(SDS,5.0 g/L)以及曲通X-100(质量分数0.5%)对反应体系影响很大。 2.9 偶氮氯膦+