超声辅助法提取辣椒多糖的工艺优化及其抗氧化活性研究.docxVIP

? ? 超声辅助法提取辣椒多糖的工艺优化及其抗氧化活性研究 ? ? 辣椒（Capsicum annuumL.）属于茄科辣椒属植物，为一年生或多年生草本植物[1]。辣椒中含有如多糖、色素、辣椒碱和蛋白质等多种有效成分[2-3]，且具有一定的保健功能和营养价值，深受人们的喜爱[4]。 在辣椒的加工生产过程中，会产生大量的辣椒渣、辣椒杆等副产物。研究发现，辣椒渣中的多糖较为丰富[5]。植物多糖具有抗氧化[6]、抗肿瘤[7]、抗衰老[8]和免疫调节[9]等多种生物活性，甚至对艾滋病毒有一定的防御能力[10]，且具有毒副作用小和不易造成残留等优点[11]。国内外对辣椒渣中研究较多的为蛋白和膳食纤维，对多糖研究较少。而植物多糖的提取、功能性及应用是目前研究的重点[12]。本文以宁夏吴忠市农作物——辣椒为原料，采用超声辅助法提取辣椒多糖，在单因素试验的基础上，利用响应面试验优化辣椒多糖提取条件，并对产物进行体外抗氧化活性评价，为辣椒渣进一步的综合利用打下了研究基础。 1 材料与方法 1.1 材料与试剂 辣椒粉，无籽辣椒渣产自宁夏宁杨食品有限公司。 无水乙醇、抗坏血酸、Tris-HCl缓冲溶液、盐酸、PBS缓冲液、过氧化氢、DPPH、ABTS、邻二氮菲、过硫酸钾、铁氰化钾、邻苯三酚、磷酸钠、三氯醋酸、FeSO4以及FeCl3等，均为分析纯。 1.2 仪器与设备 ME203E型电子天平，美国梅特勒公司；DF-101S型集热式恒温加热磁力搅拌器，巩义市予华仪器有限责任公司；KQ-250DE型数控超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司；TDL-5-A型离心机，上海安亭科学仪器厂；V-5100型紫外-可见分光光度计，上海元析仪器有限公司。 1.3 试验方法 1.3.1 辣椒多糖的提取 准确称取50.0 g辣椒粉末，加入400 mL 95%乙醇，80 ℃下回流提取3 h，提取2次，抽滤，收集滤渣干燥即为脱除辣椒素样品。取脱除辣椒素样品30.0 g，加入360 mL蒸馏水，超声波处理后，离心（4 500 r·min-1，20 min）除去滤渣和不溶物，合并滤液。将上述滤液减压并浓缩至挂壁状态，室温条件下，搅拌并加入80%的乙醇，于4 ℃条件下放置过夜，离心（4 500 r·min-1，10 min），得到沉淀物。将上述沉淀物真空干燥（真空度0.09，温度35 ℃，时间2 h），粉碎后即可得到辣椒多糖提取物。 1.3.2 辣椒多糖含量的测定 采用苯酚-硫酸法测定辣椒多糖的含量[13]。 （1）葡萄糖标准曲线的绘制。准确称取干燥至恒重的葡萄糖0.100 0 g，定容于100 mL容量瓶中，配制成葡萄糖标准溶液。取0 mL、0.2 mL、0.4 mL、0.6 mL、0.8 mL和1.0 mL标准溶液分置于试管中，加蒸馏水至2.0 mL，再加5%的苯酚溶液1.0 mL，浓硫酸5.0 mL，摇匀，静置10 min后，沸水浴中加热30 min后冷却至室温，于490 nm处测定吸光度。用2.0 mL蒸馏水作为空白对照，制得葡萄糖标准曲线为y=16.031x+0.066 9（R2=0.993 8）。 （2）样液的测定。根据标准曲线计算得出待测液中葡萄糖的含量，做3次平行。辣椒多糖含量的计算公式： 式中：ω为辣椒多糖含量，mg·g-1；ρ为吸取的待测液中葡萄糖的浓度，mg·mL-1；f为葡萄糖换算多糖的换算因子，f=3.19；m为试样质量，mg。 1.3.3 单因素试验 以辣椒多糖含量为指标，分别考察料液比（1∶8、1∶10、1∶12、1∶14和1∶16）（g∶mL）、超声功率（125 W、150 W、175 W、200 W和225 W）、超声温度（40 ℃、50 ℃、60 ℃、70 ℃和80 ℃）以及超声时间（20 min、30 min、40 min、50 min和60 min）对辣椒多糖含量的影响。 试验过程中，各因素控制量分别为超声功率为175 W、超声温度为50 ℃、超声时间为30 min、料液比为1∶12（g∶mL）。 1.3.4 响应面试验 在确定单因素试验的较佳条件（超声功率150 W、超声温度70℃、超声时间40 min）的基础上进行Box-Behnken试验设计，以辣椒多糖含量为响应值，设计超声功率、超声温度、超声时间3因素3水平的响应面进行优化，见表1。 表1 响应面试验设计因素与水平表 1.3.5 辣椒多糖体外抗氧化活性评价 （1）超氧阴离子的清除活性的测定。采用YANG 等[14]的方法，取 0.05 mol·L-1，pH 8.2的 Tris-HCl缓冲溶液5 mL置于试管中，水浴中（25 ℃）预热20 min后，加入样品溶液1 mL，加入预热的3 mmol·L-1的邻苯三酚溶液0.5 mL，摇匀，于水浴中反应5 min，再加入8 mmol·