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小儿腹泻病毒病毒检测及临床分析 婴儿腹泻是一种5岁以下儿童常见的疾病，主要由大便次数增加和粪便状态变化引起。其发病率仅次于呼吸道感染, 居第2位。据报道世界每年大约有30亿至50亿人次的5岁以下的小儿患腹泻, 严重危害儿童的身体健康和生命安全。引起小儿腹泻的常见病原体中病毒感染占85%~90%, 细菌及其他感染占0%~15%。因此, 病毒性感染越来越受到临床工作者的重视。小儿腹泻的常见病原体主要有腺病毒 (Adenovirus, ADV) 、轮状病毒 (Rotavirus, RV) 、诺如病毒 (Norovirus, NV) 、人双埃可病毒 (Human Parechovirus, HPeVs) 、札如病毒 (Sapovirus, SV) 、肠道病毒 (Enterovirus, EV) 、星状病毒 (Astrovirus, AstV) 。为了解本地区小儿腹泻病毒性感染的情况, 寻求其流行病学特征, 同时为临床上治疗小儿腹泻提供临床依据, 进行了本研究。现报告如下。 1 数据和方法 1.1 粪便标本收集 2012年1月至2014年1月涉县妇幼保健院收集腹泻患儿粪便标本350例, 男218例, 女132例, 男女比例为1.65∶1, 年龄10天至5岁, 中位年龄3岁。 1.2 多重pcr检测 标本经过生理盐水稀释后冰箱保存待检。采用反转录聚合酶链反应 (RT-PCR) 法, ADV、RV、NV、HPeVs、SV、EV、AstV逆转录引物由中国科学院上海生物细胞研究所提供。应用TaKaRa反转录试剂盒将提取的病毒RNA核酸反转录成cDNA, 反应条件为:30℃10分钟, 42℃反转录45分钟, 95℃灭活反转录酶5分钟, 然后迅速冰上放置。以合成的cDNA为模板 (ADV为DNA) , 进行多重PCR检测。PCR反应体系如下:10×Taq Buffer 2.5μl, dNTP (各2.5 mol/L) 2.0μl, MgCl222.0μl (25 mmol/L) , Taq DNA聚合酶 (5 U/μl) 0.125μl, 病毒特异性引物 (各33μmol/L) 0.2μl, 模板2.5μl, 补充无菌双蒸水至25μl。PCR扩增条件为:94℃预变性5分钟;94℃变性30秒, 55℃退火30秒, 72℃延伸1分钟, 35个扩增循环;最后以72℃终延伸7分钟, 4℃下终止反应。应用琼脂糖凝胶电泳鉴定扩增产物。 2 结果 2.1 不同性别新生儿、三期新生儿、三期新生儿、三期新生儿、三期97.2.3慢性充放电药检出情况 本研究收集的350例腹泻粪便标本中, 检出病毒阳性标本288例, 占所有标本总数的82.3% (288/350) , 其中ADV检出15例, 占总标本4.3%, RV检查87例 (24.9%) , NV检出66例 (18.9%) , HpeVS检出45例 (12.9%) , SV检出35例 (10.0%) , EV检出20例 (5.7%) , AstV检出20例 (5.7%) ;七种病毒性病原在性别间检出的情况:男性患儿占62.3% (126/201) , 女性占55.0% (82/149) , 男女比较差异无统计学意义 (χ2=2.081, P0.05) ;七种病毒在各年龄组综合感染情况差异无统计学意义 (χ2=13.262, P0.05) , 其中ADV、EV感染主要集中在6~12个月的患儿, RV、HPeVS、SV及AstV在各年龄组间的感染情况差异均无统计学意义 (P0.05) 。见表1。 2.2 不同流行季节的rv致病性腹泻发生情况 从七种病毒感染的季节分布来看, 各月间的感染情况差异有统计学意义 (χ2=61.281, P0.05) , 除AstV感染高峰在1月和12月外, 其他病毒主要感染时间集中在5~10月。ADV感染高峰5~7月, 检出比例为60.0% (9/15) , 流行季节为夏秋季节;RV检出高峰时间在6~10月, 5个月的阳性数占总阳性数的78.2% (68/87) , 与其他月份检出率相比较, 差异有统计学意义 (χ2=24.604, P0.05) , 可见RV病毒性腹泻的流行季节主要为夏秋季节;NV检出率比较高的月份是6~8月份, 其检出率为50.0% (33/66) , 与其他月份比较差异无统计学意义 (χ2=10.888, P0.05) ;HpeVS感染检出比较高的月份是5~8月份, 检出率为60.0% (27/45) , 与其他月份比较差异有统计学意义 (χ2=24.900, P0.05) , 流行季节主要在夏季;SV感染呈现无规律状态, 无季节性;EV感染高峰在7~9月份, 与其他月份相比较差异无统计学意义;AstV检出率高的月份为12月和1、2月份, 检出率为75.0% (15/2