补肾健脾中药对大鼠卵巢骨质疏松症模型骨密度的影响.docxVIP

补肾健脾中药对大鼠卵巢骨质疏松症模型骨密度的影响 骨质疏松症是一种全身骨骼疾病，其特征是骨量小、骨组织微结构受损，导致骨脆性增加和骨折风险增加。本病发病机制尚未阐明,其发生与诸多因素有关。 蛋白激酶C(PKC)是1977年在鼠脑的胞质成分中发现的一种依赖磷脂和钙的蛋白激酶,由多种同工酶亚型组成,属于丝氨酸/苏氨酸激酶家族成员之一,以其活性依赖于Ca2+而得名,参与多种生命活动,如蛋白磷酸化、信号传递、细胞增殖和分裂、跨膜离子转运、平滑肌收缩、基因表达等。本实验选取PKCα与PKCβ2作为研究对象,应用补肾益髓中药对模型大鼠进行干预,旨在探索骨质疏松症的发病机制以及补肾益髓中药的防治作用。 1 材料表面 1.1 动物 清洁级雌性4~5月龄wistar大鼠,169只,体重230g~270g,由中国医学科学院实验动物中心提供。 1.2 药品、制剂及热学试剂 实验药品:补肾壮骨益髓中药(牡蛎、鹿茸等);对照药品:骨疏康颗粒剂(辽宁康辰药业有限公司);盖天力片(东盛科技启东盖天力制药股份有限公司);健脾中药(补中益气汤方由辽宁中医药大学附属医院药房提供)。 1.3 羊抗兔抗体检测 兔抗PKCα-抗(Santa Cruz)、兔抗PKCβ2-抗(Santa Cruz)、辣根过氧化物酶标记山羊抗兔Ig G(北京中山生物公司)、碱性磷酸酶(ALP)偶联的羊抗兔抗体(北京中山生物公司)。 2 方法 2.1 时以适应菌之需要,组 1组:正常组;2组:假手术组;3组:模型空白组(模空组);4组:补肾中药低剂量组(低剂量组);5组:补肾中药高剂量组(高剂量组);6组:补中益气汤对照组(健脾组);7组:盖天力钙片对照组(盖天力组);8组:骨疏康颗粒对照组(骨疏康组)。 2.2 模型方法 手术摘除大鼠双侧卵巢的方法(去势法)造骨质疏松症模型。假手术组大鼠只切开皮肤及皮下组织,暴露双侧卵巢但不摘除。正常组不手术。 2.3 大鼠的饮食和灌胃 正常组及假手术组大鼠正常饮食不灌胃,其他各组大鼠正常饮食并给予相应药物灌胃,每日1次,共3个月。药物剂量:大鼠等效剂量按成人每日用药量的6.3倍计算,容积为0.875ml/100g体重。 2.4 碘伏消毒部位标本采集 实验大鼠在最后1次灌胃后,禁食24h后取材。大鼠经10%水合氯醛注射麻醉(0.3ml/100g体重)后用碘伏消毒手术部位,采集标本。本实验保留标本包括下丘脑(置高压灭菌EP管内-70℃保存)、左后肢股骨(置塑料保鲜袋内-70℃冰箱冻存)、子宫(称取湿重)。 2.5 统计方法 统计软件SPSS11.5方差分析法,结果以表示。 3 结果 3.1 动物模型评价 3.1.1 骨矿物质含量检测 通过双能X线骨密度分析仪(附带“The Small Subject Scout Scan”软件)对大鼠离体股骨进行检测(扫描宽度15cm,长度可任意调节,扫描速度40mm/s,分辨率为1.0×1.0mm;结果采用单位面积内的骨矿物质含量(g/cm2)表示),所得结果如下:与正常组比较,模空组大鼠股骨头骨密度显著降低(P0.01);与模型空白组比较,补肾中药高剂量组可显著增加骨密度(P0.01),而健脾中药作用不明显,与补肾中药高剂量组差异显著(P0.01)。 3.1.2 子宫指数 实验大鼠子宫指数统计结果显示,与正常组、假手术组相比较,模空组子宫指数明显降低(P0.01)。 3.1.3 肾清保健对弓背塌腰的影响 正常组大鼠皮毛光泽,活泼喜动,反应灵敏,食欲佳,无竖毛、弓背、聚堆等表现。模空组大鼠均出现弓背塌腰表现,其他表现如毛色变淡、蜷缩、聚堆、反应迟钝、喜静懒动、抗应激能力下降等症状不十分明显,各剂量补肾中药组及阳性对照组的弓背塌腰表现较模空组为轻。用药各组弓背塌腰症状改善率为:低剂量组33.3%,高剂量组52.4%,健脾组15.8%,盖天力组30%,骨疏康组25%。 从以上结果分析,本次实验骨质疏松症大鼠模型造模成功,且以弓背塌腰症状为肾虚模型的表征信息,补肾各组优于健脾组。 3.2 干预性组织中的2c、2c 3.2.1 pkc和pkc2蛋白表达 Western blotting法检测大鼠下丘脑组织中PKCα、PKCβ2蛋白表达。经Scion Image软件进行灰度值测量后进行统计分析。 3.2.2 各组大鼠血清中pb-健脾、盖天力、骨疏康组pf 大鼠下丘脑组织中PKCα、PKCβ2的蛋白表达结果显示,与正常组相比,模空组显著增高(P0.01);与模空组相比,低剂量组、高剂量组、健脾组、盖天力组、骨疏康组均有显著降低(P0.01);与低剂量组相比,高剂量组、健脾组、盖天力组、骨疏康组有显著差异(P0.01)。补肾各组与补脾组蛋白表达较模空组降低,趋近正常组,均有改善作用,但补肾中药优于健脾中药。 4 讨论 4.1 去势重新