蛋白质工程专业知识讲座.pptx

蛋白质工程与食品产业;;一、蛋白质功能与构造;1.1蛋白质功能;;1.2蛋白质构造;;二级构造：主链原子局部空间排列，不包括侧链构象和与其他链段互相关系，如?-螺旋、?-折叠等主链构象单元就是二级构造。;三级构造：蛋白质多肽链在多种二级构造基础上再深入盘曲或折叠形成具有一定规律三维空间构造。;四级构造：具有二条或二条以上独立三级构造多肽链组成蛋白质，其多肽链间通过次级键互相组合而形成空间构造。其中，每个具有独立三级构造多肽链单位称为亚基。四级构造事实上是指亚基立体排布、互相作用及接触部位布局。如血红蛋白分子中四个亚基之间空间关系。 ;二、蛋白质工程诞生;;生物理论和技术在下列九方面发展促进了蛋白质工程诞生： ①新克隆技术，尤其是完整cDNA克隆技术； ②迅速测定DNA序列办法； ③从DNA序列推算蛋白质序列计算机程序系统； ④蛋白质序列数据库建立，使一级构造相同蛋白质能被很快地判定出来，由此研究其功能上相同性；;;三、蛋白质工程基本步骤和改造办法;3.1 蛋白质工程研究基本步骤;3.2.2 合成全新蛋白质; ;四 食物蛋白质改性技术;;序 号;磷酸化作用;糖基化作用;蛋白水解作用;物理改性;五、蛋白质工程在食品产业中应用;溶菌酶是一种广泛应用于食品工业酶制剂，其催化速率随温度升高而升高，因此，它热稳定性是提升其应用潜力主要标准。 蛋白质晶体构造研究表白，T4溶菌酶分子一种主要特性是在第97位和54位残基上是两个未形成二硫键半胱氨酸，因此，构想通过在分子中增加一对或数对二硫键，来提升酶热稳定性。 采取定位突变技术使该菌肽链第9位和第164位氨基酸残基转变为半胱氨酸，并形成一对二硫键，取得突变体酶活性高于天然酶6%，熔点温度提升6.4度； 新引入“工程二硫键”能够稳定两个构造域之间相对位置，进而稳定了由两个构造域所形成活性中心。 ;纤维素酶是一类水解纤维素中β-1,4-葡萄糖苷键糖苷水解酶。 根据氨基酸序列有关性，糖苷水解酶可分为82个家族，其中纤维素酶占其中13个家族。纤维素酶根据其催化功能不一样，又可分为内切葡萄糖苷酶、外切葡萄糖苷酶和纤维二糖酶。 自1923年在蜗牛消化液中发觉纤维素酶至今已有100数年。对纤维素酶研究分三个阶段： 第一种阶段是1980年此前，主要工作是利用生物化学办法对纤维素酶进行分离纯化； 第二个阶段是从1980年到1988年，主要工作是利用基因工程办法对纤维素酶基因进行克隆和一级构造测定； 第三阶段是从1988年至今，主要工作是利用蛋白质工程办法对纤维素酶构造域拆分、解析、功能氨基酸确实定、水解双置换机制确实定、分子折叠和催化机制关系探讨。 ;;微生物脂肪酶是一类能催化水解、酯化、酯交换、转酯、醇解、酸解以及氨解反应等多种化学反应工业生物催化剂。 脂肪酶催化化学反应具有化学选择、立体选择性、位点选择性、催化活性高而副反应少、催化反应又不需要辅助因子等特点 广泛应用于食品加工、油脂加工、新型生物材料、生物传感器、生物医学、化装品、杀虫剂、生物柴油、去污剂、皮革加工、造纸、生物修复、医药、精细化工、去污剂添加剂、造纸、皮革等很多工业领域； ;;;脂肪酶化学修饰;小分子修饰法　　小分子修饰法是利用小分子化合物如醛、酮、羧酸、脂肪酸等与脂肪酶表面暴露游离羟基、酚羟基、巯基、羧基、氨基等基团反应，从而变化脂肪酶酶学性质。 利用脂肪酸修饰C. viscosum（染色粘性菌 ）脂肪酶，该酶酯交换活性从0 mmol/(h·g)提升到270mmol/(h·g)。;35;脂肪酶分子进化;理性设计;定向进化（自然选择）;随机突变　;;基因重组　;;;;植酸酶改性策略;定点突变提升植酸酶体现量;;改善植酸酶热稳定性;改良饲用植酸酶最适PH;;思考题;感激亲观看此幻灯片，此课件部分内容起源于网络， 如有侵权请及时联系我们删除，谢谢配合！;感激亲观看此幻灯片，此课件部分内容起源于网络， 如有侵权请及时联系我们删除，谢谢配合！