当归多糖对老年痴呆小鼠脑组织钙超载及胆碱能神经损伤的影响.docxVIP

当归多糖对老年痴呆小鼠脑组织钙超载及胆碱能神经损伤的影响 脑瘫综合征是老年人常见的疾病。目前，没有理想的治疗方案。因此，早期发现和及时预防已成为医学研究的重点。由于西药疗效不尽人意, 而且多数价格较昂贵, 所以从单味中药提取有效成分用于及早防治成为该领域研究的重要组成部分。大量研究证实:中药多糖确有明显的延缓衰老的作用。当归多糖是甘肃道地药材当归的有效成分之一, 已有文献报道:当归多糖具有抗肿瘤、延缓衰老、治疗老年痴呆等作用, 但是其延缓衰老和治疗老年痴呆的确切机制尚未明确, 因此本研究观察老年痴呆小鼠小鼠脑组织Ca2+浓度、Ca2+-ATPase、Ca2+Mg2+-ATPase和Ach E活性的变化, 以期揭示当归多糖抗衰老和治疗老年痴呆的作用机制。 1 材料和机器 1.1 实验动物驱动模型 清洁级昆明种小鼠72只, 雌雄各半, 体质量 (20±2) g, 由甘肃中医学院科研动物中心提供, 实验动物合格证号:SCXK (甘) 2011-0001-0001126。 1.2 试剂与仪器 当归多糖, 陕西慈缘生物技术有限公司产品, 批号CY110320, 用生理盐水配制成10 g/L的储备液以备用。D-半乳糖, 北京化学试剂公司产品, 批号020123, 临用前用生理盐水配制成12 g/L液体备用;亚硝酸钠, 西安化学试剂厂产品, 批号860723, 临用前用生理盐水配制成9 g/L液体备用。钙测定试剂盒 (批 、Ca2+-ATPase试剂盒 (批 、Ca2+Mg2+-ATPase试剂盒 (批 、Ach E试剂盒 (批 及考马斯亮蓝测定试剂盒 (批 , 均由南京建成生物工程研究所提供。SK3300H型数控超声波清洗器, 上海科导超声仪器有限公司产品;VIS-723N型紫外可见分光光度计, 北京瑞利分析仪器有限公司产品;BS224S型电子天平, 赛多利斯科学仪器有限公司产品;HH-4数显恒温水浴锅, 郑州杜甫仪器厂产品;XYJ80-20型离心机, 金坛市恒丰仪器厂产品;XW-80A型旋涡混匀器, 上海精科实业有限公司产品;ZY12306型微量加样器, Scientific产品。 1.3 模型分组及给药 将小鼠按照随机数字表法分为空白对照组、模型对照组、脑复康组及当归多糖低、中、高剂量组共6组, 每组12只。除空白对照组外, 其余各组每日腹腔注射D-半乳糖120μg/g和亚硝酸钠90μg/g, 联合给药制备老年痴呆小鼠模型;空白对照组腹腔注射等体积的生理盐水, 连续30 d。30 d后, 腹腔注射同时, 脑复康组灌胃给脑复康200μg/g, 当归多糖高、中、低剂量组则依次灌胃给当归多糖400, 200和100μg/g;模型对照组及空白对照组灌服等体积的生理盐水, 连续6周。断头处死小鼠, 取大脑用冷生理盐水冲洗, 剥取大脑组织, 用生理盐水制成100 g/L脑匀浆, 3000 rpm/min低温离心10 min, 取上清液备用。 1.4 ache活性测定 定磷法分别比色测定Ca2+浓度及Ca2+-AT-Pase、Ca2+Mg2+-ATPase活性;对称三硝基苯 (TNB) 比色测定Ach E活性;考马斯亮蓝检测蛋白定量。检测步骤严格遵照试剂盒说明书。 1.5 组间比较方法 采用SPSS 14.0统计分析软件处理。所有数据以均数±标准差 (s) 表示, 组间比较采用单因素方差分析。以P0.05为差别有统计学意义。 2 结果 2.1 降,差别有统计学意义 与空白对照组对比, 模型对照组小鼠脑组织Ca2+浓度升高, Ca2+-ATPase及Ca2+Mg2+-ATPase活性下降, 差别有统计学意义 (P0.01) 。与模型对照组对比, 当归多糖各剂量组脑组织Ca2+浓度降低, Ca2+-ATPase及Ca2+Mg2+-ATPase活性增高, 尤其中、高剂量组Ca2+Mg2+-ATPase活性提高更为明显, 差别有统计学意义 (P0.05或P0.01) ;与脑复康组对比, 高剂量组较之差别有统计学意义 (P0.05) 。见表1。 2.2 多糖对ache活性的影响 与空白对照组对比, 模型对照组小鼠脑组织AchE活性升高 (P0.01) 。与模型对照组对比, 当归多糖各剂量组AchE活性降低 (P0.05或P0.01) ;与脑复康组对比, 仅高剂量组较之差别有统计学意义 (P0.05) 。见表2。 3 中药多糖对老年痴呆模型小鼠脑ca2+-atpase活性的影响 老年性痴呆是一种以进行性认知障碍和记忆能力损害为主的中枢神经系统退变性疾病。目前有关痴呆的学说很多, 如钙稳态失调、胆碱能神经损害、自由基损伤、基因突变、能量代谢障碍、神经细胞凋亡、淀