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茶色素溶液对离体蟾心肌收缩力和心率的影响 茶色素是英国的威廉在20世纪50年代从绿茶中提取的一种亲水酚类物质。国内临床资料报道证实,茶色素有防癌抗癌、防紫外线照射、抗动脉粥样硬化、防治高血脂症、增强免疫、抗血栓、抗氧化等多种药理功能,但茶色素对离体蟾蜍心肌收缩力的作用目前尚无报道。因此,本研究观察不同浓度茶色素(Tea pigment,TP)溶液在低钙和高钙条件下对离体蟾蜍心肌收缩力和心率的影响,以期阐明其部分作用机制。 1 材料和方法 1.1 实验1.实验条件 中华蟾蜍50只,雌雄兼有,体质量80~100 g,由大连医科大学实验动物中心提供,选择北方7~10月开展本实验。动物随机分为正常任氏液组,任氏液+茶色素组,低钙任氏液+茶色素组和高钙任氏液+茶色素组。其中低钙任氏液+茶色素组又分为低钙任氏液+茶色素(200μg·m L-1)组、低钙任氏液+茶色素(100μg·m L-1)组和低钙任氏液+茶色素(50μg·m L-1)组,每组10只。 1.2 茶色素的配制 茶色素,大连理工大学化工学院李楠教授馈赠,江西绿色制药有限公司生产并鉴定,鉴定TP纯度以游离儿茶素计36.27%,批号将10 mg茶色素粉末用1 m L的蒸馏水溶解,配制成10 mg·m L-1的茶色素溶液,分瓶冷藏储存;任氏液,1000 m L蒸馏水中含Na Cl 6.50 g,KCl 0.14 g,Ca Cl20.12 g,Na HCO30.20 g,Na H2PO40.01 g;低钙任氏液,1000 m L蒸馏水中含Ca Cl20.06g,其余成分同任氏液;高钙任氏液,1000 m L蒸馏水中含Ca Cl20.24 g,其余成分同任氏液。BL-420F生物机能实验系统和张力换能器,成都泰盟科技有限公司。 1.3 方法 1.3.1 相对固定时患者有适当的动脉球心插管入心 取1只蟾蜍破坏其脑和脊髓后,仰卧位固定于蛙板上,剪开胸壁,暴露心脏,在两个主动脉球上端向心脏方向剪一斜向的切口,将盛有少量任氏液的玻璃蛙心插管先插向动脉球,随后在心收缩期插向心室,将其中一根线结扎并固定;另一根线远离静脉窦结扎其余的动静脉。若插管的管尖游离在蟾蜍的心室内,则见管中液面随着心搏而升降。将心脏和静脉窦一起剪下,吸去管内的血液,并用任氏液反复冲洗心室内的血液,然后在蛙心套管内加入1.0m L任氏液。 1.3.2 换能器输出线与计算机的输入接口相连 将玻璃蛙心插管的上端用试管夹固定于铁支架台上,将蛙心夹上的丝线连接与张力换能器的弹簧片上,换能器的输出线与计算机的输入接口相连。待蟾蜍心脏插管稳定1 h左右,采用计算机描记心肌收缩曲线,应用BL-420F生物机能实验系统记录蟾蜍的心肌收缩曲线,心室外容积固定为1.0m L,调整张力换能器与蟾蜍心脏之间连线的张力至2 g左右,固定放大器灵敏度,时间常数和滤波等参数。 1.3.3 茶色素酯溶液 正常任氏液组离体蟾蜍心脏只灌流任氏液,其余各组在任氏液或高钙任氏液或低钙任氏液基础上加入茶色素溶液。通过蟾蜍心室外加药,并利用心室收缩波动,心室内吸收药物的方法给药。心室外容积固定为1.0 m L,每次加入20μL茶色素溶液前需先取出20μL灌流液,加入茶色素后记录40min内心搏曲线。 1.4 统计处理方法 所有数据以均数±标准差(ue0af±s)表示,应用SPSS19.0统计软件,组间进行t检验,P0.05为差异有统计学意义。 2 结果 2.1 心肌收缩力的影响 见表1。正常对照组蟾蜍离体蛙心灌流标本在适宜条件下且在2 h内心肌收缩力和心率基本上无显著性变化(P0.05)。在任氏液中加入20μL浓度为10 mg·m L-1的茶色素时,心室外浓度为200μg·m L-1后,心肌收缩力在加药前后分别是(2.58±0.04)g和(2.53±0.03)g(P0.05)。当蟾蜍离体蛙心灌流标本任氏液更换为高钙任氏液稳定后,在高钙任氏液中加入20μL浓度为10 mg·m L-1的茶色素,即心室外浓度为200μg·m L-1后,心肌收缩力在加药后心肌收缩力开始抑制,平均降至波谷的时间为10 min。心肌收缩力给药前后比较,差异有统计学意义(P0.01);蟾蜍离体蛙心灌流标本的心率在任氏液或高钙任氏液加药前后均无显著变化,差异无统计学意义(P0.05)。 2.2 茶色素对心肌收缩力的影响 见表2。正常蟾蜍离体蛙心灌流标本在灌流任氏液1 h后,换等量的低钙任氏液灌流,在低钙任氏液灌流稳定的情况下加各种浓度的茶色素,观察和记录心肌收缩力的变化。在低钙任氏液中加入茶色素心肌收缩力开始兴奋,心肌收缩力平均升至波峰的时间为30 min。在低钙任氏液中加入茶色素使心室外浓度为50μg·m L-1后心肌收缩力在加药前后比较差异有统计学意义(P0.05);在心室外