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大白鼠心肌缺血模型的制备及评价 动脉左前降支是左心供血的主要血管。如果血管阻塞，可能会导致室间隔和左室前壁坏死。左前降支连接动脉左后节是心脏病变形成最好的血管。因为老鼠在进化方面接近人类，价格低、饲养方便。冠状动脉侧支循环少，心肌坏死快，心率异常，发病率高，重复性好、稳定性好，成为心脏肌腱缺血模型的首选。然而，对大鼠解剖的研究信息很少，实验过程复杂，耗时长，成功率低。如果方法不当，很容易死亡，也无法达到预期的实验目的。因此，我们研究了模型的准备，观察了模型前后心电图的变化，并对准备过程中的相关问题进行了评估。 1 药品及器械 1.1动物及分组 SD大鼠60只,体重200～250g,由成都中医药大学实验动物研究中心提供,动物质量合格证号:川实动质第11号.雌雄不拘. 2.药品及器械: 20%乌拉坦,即时配制,生理盐水,SC—3型人工电动呼吸机(上海医疗器械四厂产品),Cardimax FX——101B心电图仪(日本琴岛福田公司产品),眼科手术剪,弯头无齿镊,小持针器,自制小拉构,小圆弯针,三角直针,0号缝线. 2 呼吸频率及呼吸参数控制 以20%乌拉坦按0.5ml/100g腹腔注射.颈部去毛,作正中纵向切口约1cm长,顿性分离皮下喉部肌肉,暴露气管,横向切开气管插管接呼吸机,按1～1.5ml/100g潮气量,70～80次/分的频率给予呼气末持续正压呼吸,呼吸比为2:1,根据呼吸频率及深度调整呼吸参数.胸部去毛,正中线左边约0.5cm处作约2cm长的纵向切口,钝性分离胸大肌,暴露肋骨,用止血棉完全止血.小心剪断3-5肋,安放小拉钩牵拉胸壁,使心脏(主要是心底部)得到充分暴露.用小圆弯镊剥脱心包,使左心耳与动脉圆锥之间的静脉清晰可见,以此为标志进行结扎.结扎完毕逐层缝合胸壁之前,置入一根小塑料管,待胸壁关闭之后抽气恢复胸腔内负压.待稳定一段时间后拔出气管导管,可恢复自主呼吸.四肢皮下插入针形电极,记录I,II,III导联心电图,观察手术前后的心电图变化. 3 对大鼠急性心肌缺血模型的评价 3.1 大鼠急性心肌缺血模型成功的因素 大鼠心肌缺血模型制备需要气管插管、呼吸机给氧.结扎冠状动脉在胸腔内进行,视野小,心脏不好固定,结扎冠状动脉时很难把握进针位置及深度.并且由于损伤较严重、出血多、耗时长,许多模型由于气管插管、失血多及操作不善即造成大鼠死亡,从而影响造模成功率.为了保证大鼠急性心肌缺血模型的成功,需要注意下面几个环节: 3.1.1 麻醉大鼠操作要点 传统的麻醉药多采用戊巴比妥钠,因其呼吸抑制作用明显,手术后宜引起大鼠呼吸衰竭而死亡,并且对心脏有一定抑制作用,特别是当静脉注射快时,可加快心率,使S-T段移位,T波倒置.乙醚有安全度大,苏醒快的优点,但乙醚麻醉往往呼吸道分泌物较多,容易引起呼吸道阻塞和窒息.乌拉坦和水合氯醛麻醉对呼吸抑制较少,对心脏毒性小,且安全范围广,剂量易掌握.因此在我们的实验中采用乌拉坦或水合氯醛进行麻醉,大鼠麻醉后心律失常发生率不高,且大鼠术后苏醒快,呼吸道分泌物少,减少麻醉意外,死亡率低.为了避免麻醉引起的死亡现象,在操作上需要注意下面几点:①每一只动物均严格称重,精确计算麻醉药量.对衰弱和过重动物,将单位体重所需剂量适当调小.②动物在麻醉期间予以保温,一般使用40w灯泡照射.②因各种原因将部分麻醉药注射到大鼠体外的,不应补量再注射,改换其他大鼠麻醉.④尽量做到麻醉药现用现配,或配少量短期内使用,防止日久变质. 3.1.2 急性肺水肿的发病率 开胸后的手术步骤多数文献报道是:将心脏挤出胸腔,翻开左心耳,结扎冠脉主干.挤出心脏容易导致心脏与大血管牵扯挤压,增加严重心律失常、急性肺水肿的发病率.本实验采用拉钩法暴露心脏,有操作容易,暴露充分,损伤小的优点.另外开胸时最易伤及充气的肺组织,因此应在短时间内将潮气量调小,从而使手术伤及肺的机率大为减少.大鼠右肺四叶,左肺一叶,呈海绵状,尤其左肺,有时将心脏大部分覆盖.因而结扎冠脉时需拉开肺组织,稍有不慎,手术器械或拉钩就可能损伤肺.使用棉球或纱布将肺组织推开,拉钩亦用纱布缠起,避免硬物接触肺,可以大大降低肺的损伤. 3.1.3 不同的静脉入路,选择合适的左冠状静脉东南角小 如何准确结扎冠脉是本模型最为关键的地方.结扎部位离冠状动脉起源处愈远,所结扎的血管愈细,肉眼难分辨,手术操作因难,造成心肌缺血损伤面积较小,但能降低实验动物的死亡率.本研究参照有关文献,以左冠状静脉主干为标志,选择左心耳下缘1.5mm处进针,在肺动脉圆锥旁出针,使操作简便易行,并且结扎成功率高,动物死亡率低. 3.1.4 开腹前后主动脉穿线时间的选择 大鼠急性心肌缺血模型,造模死亡率在30%左右,为提高模型成功率,在开胸后,冠脉穿线前,最好留一段时间以平衡手术创伤,这段时间以5～15分钟之间为宜