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大鼠下腔静脉血栓模型的建立与手术技巧 静脉血栓形成的症状包括深静脉血栓形成（dvt）和肺血栓形成。这是临床上常见的血管疾病，通常发生在股关节后和老年老体育中。目前，全世界范围内发病率和死亡率有所增加1%。 DVT栓子脱落后, 经上腔或下腔静脉进入肺循环, 引发肺栓塞。 研究DVT的发病机制和疾病发展过程, 需要合适的研究对象, 出于伦理等因素, 研究者很难获得DVT患者的静脉组织或血栓直接进行研究［2］, 因此, 建立可进行实时观察研究的DVT动物模型成为必要的替代方法。 理想的动物血栓模型应具备成栓稳定、制备技术简单、操作迅速、易重复等特点, 所形成的血栓体积、质量应较大以易于分子鉴定, 形成的血栓应在深静脉中 (例如下腔静脉)［3－4］。 SD大鼠具有培养繁殖快、价格低、手术耐受性强、可操作性高等优点, 是一种较理想的实验物种, 本研究选其作为造模动物, 并应用狭窄法结扎下腔静脉, 造成下腔静脉血流淤滞, 血管管腔内形成血栓, 成功建立下腔静脉血栓模型。 结果及经验报道如下。 1 材料和方法 1.1 材料表面 1.1.1 实验动物的饲养 健康清洁级SD大鼠64 只, 雌性, 体重180~230 g, 由昆明医学院实验动物中心提供, 实验动物生产许可证号:SCXK (滇) 2011-0004, 实验动物分笼饲养, 均给标准饲料喂养, 自由饮水。动物分组先将64 只大鼠按阿拉伯数字顺序编号, 采用随机数表法将动物随机分为两组:造模组 (n = 56) 和对照组 (n = 8) 。 1.1.2 针对党内问题,网络生产经营国 10%水合氯醛由昆明医科大学第一附属医院制剂厂提供 ;青霉素 (S0906808) 为石家庄华北制药有限股份公司生产;手术器械由昆明医科大学外科手术实验室提供;4-0、5-0 爱惜康缝线 (SA84G) 为强生 (中国) 医疗器材有限公司生产;组织标本病理切片在昆明医科大学第三附属医院病理科完成。 1.2 方法 1.2.1 下腔静脉“狭窄”模型的建立 造模组大鼠术前12 h禁食, 不限饮水。 10%水合氯醛与生理盐水1∶1 稀释之后配成5%水合氯醛将5%水合氯醛按 (3.5 ml / kg) 经腹腔注射麻醉。 麻醉起效后常规备皮、消毒、铺巾, 参照国外文献报道下腔静脉结扎小鼠的手术程序和经验［5］, 经大鼠腹部正中切口进腹, 将小肠牵向术野左侧, 充分显露下腔静脉, 打开后腹膜, 确认左肾静脉下方2 mm处的下腔静脉结扎点, 仔细游离下腔静脉, 用5-0 爱惜康缝线逐一显露和结扎左肾静脉以下的下腔静脉分支至髂静脉水平。结扎下腔静脉分支后, 在结扎点穿过5-0 爱惜康缝线, 另取1 根4-0 爱惜康缝线与下腔静脉主干并排, 5-0 缝线方结打结之后, 谨慎抽出并排的4-0 缝线, 完成下腔静脉“狭窄”模型 (图1) 此方法即为“狭窄法”。主要操作结束后, 确认大鼠呼吸循环平稳, 逐层关腹, 皮下洒少许青霉素粉末。 对照组大鼠术前12 h禁食, 不限饮水, 与造模组相同麻醉, 开腹、 显露下腔静脉结扎点后用5-爱惜康缝线结扎, 打单个结, 然后抽出线结, 解除结扎, 确认无活动出血, 关腹程序同造模组。 所有实验大鼠术后保暖, 保持环境温度在25℃左右。 单独饲养, 麻醉清醒后少量饮水并给予食物 1.2.2 静脉血栓形成情况 术后观察动物的活动、进食及饮水情况, 在实验饲养期间观察动物生存情况, 观察造模组大鼠术后2 h (n = 8) 、6 h (n = 8) 、24 h (n = 8) 、48 h (n = 8) 、7 d (n = 8) 、14 d (n = 8) 、21 d (n = 8) 的下腔静脉血栓形成情况。 同时, 在上述时间点及刚完成开关腹时, 各选1 只对照组大鼠观察血栓形成情况 (n = 8) 。 病理学检查:按上述时间点, 取下腔静脉组织标本, 采用4%多聚甲醛固定24 h, 脱水后常规石蜡包埋, 苏木素-伊红染色, 不同倍数光镜下观察。 1.3 统计方法 采用SPSS17.0 统计软件, 计量资料间的比较采用t检验, P≤0.05 为差异有统计学意义。 2 结果 2.2 造民法结构术后血栓形成情况 在各个观察时间点, 对照组大鼠仅见少许腹腔粘连, 下腔静脉无肉眼血栓形成, 说明结扎血管这一步骤并不是血栓形成的直接原因。 图2、3 显示狭窄法造模组术后各时间点血栓形成情况。 术后2 h可见有血栓形成 (6 / 8, 75%) ;至术后6 h均可见血栓形成 (8 / 8, 100%) ;术后24、48 h, 血栓形成稳定, 并有管腔内明显充血 (16 / 16, 100%) ;术后7 d血栓已没有明显充血 (8 / 8, 100%) , 术后14 d血栓开始缩小 (8