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莲子心生物碱类成分分离鉴定及其抗心律失常作用初步研究 莲子心是睡莲科植物的成熟种子。莲子心为常用中药, 传统医学认为其具有清心安神、交通心肾、涩精止血之功效。现代研究表明, 莲子心治疗心血管疾病的有效部位为生物碱类成分。其中甲基莲心碱、异莲心碱、莲心碱等3种双苄基异喹啉类生物碱具有显著的抗心律失常、抗心肌缺血、降压等药理活性, 已成为现代中医药研究的热点之一。 1 材料表面 1.1 动物 雄性SD大鼠, 体重200～250 g, 由北京维通利华实验动物技术有限公司提供, 合格证号:SCXK (京) 2006-0006。 1.2 试剂及仪器 地奥心血康胶囊 (批号0203073) , 四川成都地奥集团;层析用硅胶, 青岛海洋化工有限公司生产;除甲醇为Fisher公司产, 其余所用试剂均为分析纯, 北京化工厂生产。莲子心药材于2007年11月购自湖南湘潭, 经中国中医科学院中药所生药室何希荣主管技师鉴定。莲子心总生物碱溶液:取总生物碱提取物, 加水及少量吐温80溶解, 分别制成5.0, 10.0, 20.0 mg·mL-1的溶液。 1.3 红外分光光度仪 质谱仪:VG-250气质联用仪, (英国TRACE-EI-MS) ;NEXUS-FTIR型红外分光光度仪 (Nicolet公司生产) ;HP 1100型高效液相色谱仪;AL-400核磁共振波谱仪 (JEOL公司生产) 。Biopac MP-100生理多用仪, 美国;HB-140B型动物呼吸机 (浙江医科大学医学仪器厂) 。 2 方法和结果 2.1 莲子心总原则 取莲子心粉末50 kg, 加入含1‰盐酸的80%乙醇溶液500 L, 浸泡1 h, 搅拌1 h, 第2次加入400 L溶剂, 搅拌1 h, 第3次同样加入400 L溶剂, 搅拌30 min, 过滤, 回收乙醇至无醇味, 离心, 取上清液, 加2 mol·L-1NaOH溶液调pH值8～9, 离心, 取沉淀, 干燥, 得到莲子心总生物碱约500 g。 2.2 莲子心总氨基酸的分离和结构试验 2.2.1 化合物的合成 取上述干燥至恒重的总生物碱100 g, 进行硅胶柱层析, 三氯甲烷-二乙胺梯度洗脱, 99∶1梯度下得到化合物Ⅰ, 97∶3梯度下得到化合物Ⅱ, 95∶5梯度下得到化合物Ⅲ。 取化合物Ⅰ粗品1 g溶于1%盐酸, 三氯甲烷反复萃取, 取酸水层用氨水调节pH值至8～9, 三氯甲烷萃取, 回收三氯甲烷, 残渣用无水乙醇反复重结晶得到淡黄色无定形粉末:化合物Ⅰ (180 mg) 。 取化合物Ⅱ粗品500 mg, 溶于热的无水乙醇, 加入稍过量的4%盐酸, 放置析晶。将结晶溶于3%氢氧化钠溶液, 加入氯化铵直到析出乳白色沉淀为止, 用三氯甲烷反复提取, 蒸馏水洗涤, 无水硫酸钠脱水, 得松散的黄白色无定形粉末:化合物Ⅱ (98 mg) 。 取化合物Ⅲ粗品1 g, 溶于适量的无水乙醇中, 微热溶解, 在冰水冷却下, 滴加稍过量的70%高氯酸, 使溶液呈酸性, 置冰箱过夜, 析出黄色颗粒状结晶, 过滤, 用冷却无水乙醇洗涤得白色颗粒状结晶:化合物Ⅲ的高氯酸盐。取该高氯酸盐溶于3%NaOH溶液中, 加入适量固体氯化铵, 直到析出乳白色沉淀为止, 依次用三氯甲烷、水提取洗涤, 无水硫酸钠干燥, 得松散的白色无定形粉末:化合物Ⅲ (100 mg) 。 2.2.2 cnmr谱图谱分析 化合物Ⅰ:淡黄色无定形粉末, mp59～61 ℃, 改良碘化铋钾显色为阳性, UV (MeOH) λmaxnm:283.0; IR (KBr, cm-1) :3400 (OH) , 2937 (C-H) , 2835、2792 (O-CH3或N-CH3) , 1612, 1510 (苯环骨架振动) , 1464 (δasCH3) , 1248, 1227, 1018;EI-MS显示基峰为206, 主要碎片离子有m/z625 (M+1) 。1HNMR:δ3.64 (1H, m, 1-H) , δ 2.50 (3H, s, 2-NCH3) , δ2.75 (1H, m, 3-H) , δ3.16 (1H, m, 3-H) , δ2.57 (1H, m, 4-H) , δ2.81 (1H, m, 4-H) , δ6.50 (1H, s, 5-H) , δ3.71 (3H, s, 6-OCH3) , δ6.62 (1H, s, 8-H) , δ2.67 (1H, m, 9-H) , δ3.09 (1H, m, 9-H) , δ6.89 (1H, d, J=8.6, 11-H) , δ6.68 (1H, d, J=8.7, 12-H) , δ6.68 (1H, d, J=8.7, 14-H) , δ6.89 (1H, d, J=8.6, 15-H) , δ3.51