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肝纤维化过程中上皮-间充质转化的研究进展 肝纤维素质炎是肝脏应对各种疾病（炎症、酒精、寄生虫、化学物质、免疫、营养代谢障碍等）刺激的自我恢复反应。损伤的肝细胞分泌了几种遗传因子，激活了肝星形细胞，并将其转化为肝肌强化细胞（mfb）。mfb通过旁入和自分泌功能产生以沉积物为主要成分的大量细胞外基质（mcclovac）。通过残留和转化亚甲基物质，肝纤维素最终进入肝硬化和肝癌。 近年研究证明,肝纤维化过程存在上皮-间充质转化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)现象,这为抗纤维化药物的开发提供了新的靶点。本文综述了可能参与转化的各种肝内细胞及涉及EMT的调控信号通路,并在此基础上,探讨了以EMT为靶标的抗肝纤维化治疗策略的可行性及研究进展。 1 emt的组成及作用机制 EMT是指分化成熟的极化上皮细胞在外界因素的刺激下,获得某些间充质细胞的特征(如极性丧失、细胞骨架蛋白改变和成纤维细胞样外形等)使其具有更强的活性和迁移性。早在1982年,Greenburg等在培养晶状体上皮细胞时就发现这些细胞在胶原凝胶中可以获得间充质细胞样形态,首先提出了EMT的概念。EMT与多种生长因子和转录调节因子有关,可通过多条信号转导通路起作用,在胚胎发育、损伤修复、组织纤维化、肿瘤的发生、发展、转移及耐药性等方面都有着重要的作用。 EMT主要由四步组成:(1)失去上皮黏附特性;(2)表达平α-平滑肌肌动蛋白(Alpha-smooth muscle actin,α-SMA),肌动蛋白重排;(3)基底膜瓦解;(4)细胞移动性和侵袭性增强。具体表现为细胞形态由立方型变成梭形,类似成纤维细胞形态,电镜下可见细胞失去极性,微绒毛消失,与周围细胞和基质的接触减少,细胞黏附力下降,细胞内出现密体,胞质内出现大量肌动蛋白微丝,迁移和运动能力增强。同时细胞表型发生改变,上皮细胞的标志物如E-钙黏蛋白、α-连环素、β-连环素、γ-连环素、桥粒斑蛋白、紧密连接蛋白、角蛋白、黏蛋白等表达下调;而间质表型标记物表达上调,如成纤维细胞特异性蛋白-1(Fibroblast specific protein-1,FSP-1)、波形蛋白、纤维连接蛋白、N-钙黏蛋白等。如果细胞在过渡阶段,两类细胞标志可同时表达。 2 emt与肝纤维化 对于慢性脏器纤维化疾病,EMT有两方面的双重作用:一方面,通过EMT,分泌ECM的成纤维细胞或MFB越来越多;另一方面,EMT导致了上皮细胞的大量流失,加剧纤维化组织的实质结构破坏。Xu等指出EMT中上皮细胞获得了成纤维细胞的表型,出现间质细胞标志物,最终可能发展为MFB,促进肝纤维化的发生与发展。Kuroda等也认同这一观点,认为间质成纤维细胞是具有间质细胞表型的一类细胞,而MFB则是一类活化的间质成纤维细胞,表达独特的分子标记蛋白α-SMA,在一些细胞因子如转化生长因子β(TGF-β)等的刺激下,这些在EMT过程中生成的间质成纤维细胞就可转变为MFB,促进肝纤维化的发生发展。 慢性肝损伤包括缺氧、炎症和病毒感染等导致肝纤维化的发生,研究证明这些损伤诱发肝内细胞EMT。Bose等研究结果显示,丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)通过激活AKT/β-连环素信号通路诱导人原代肝细胞发生EMT。他们用病毒感染体外培养的人原代肝细胞,发现细胞表现出成纤维细胞样形态,且波形蛋白、FSP-1、snail、slug和twist的表达上调,上皮细胞标志物E-钙黏蛋白表达下调。感染病毒的纤维化肝组织活检,也发现snail、twist基因表达上调,证明EMT参与病毒感染导致的肝纤维化。丁型肝炎病毒也能通过激活TGF-β信号通路,诱导EMT和纤维化的发生。慢性损伤的肝脏由于肝内血管分流、肝静脉阻塞、肝窦面积减少、肝窦毛细血管化等因素导致缺氧微环境的产生,这一病理改变通过多种机制诱导、促进肝纤维化。Copple等研究提示缺氧能够通过缺氧诱导因子(Hypoxia inducible factors,HIFs)依赖的信号机制诱导肝细胞发生EMT。他们通过体外原代肝细胞缺氧实验、体内胆管结扎动物肝纤维化模型实验,证明缺氧环境下肝细胞上皮标志物表达下调,同时间质细胞标志物表达上调,而HIF缺陷的细胞和小鼠不发生这种变化。给予TGF-β受体抑制剂,这种诱导作用被抑制。Lopez-Novoa等认为慢性炎症这一普遍存在于纤维化器官的微环境也是EMT的强力诱导因素。如果这些间接证明EMT参与、促进肝纤维发展进程,下面这些研究将提供更直接更具说服力的证据。 2008年,Diaz等人运用免疫染色方法,检测胆道闭锁和其他肝脏疾病病人的肝组织样本,发现在胆道闭锁、原发性胆汁性肝硬化等胆小管增生肝疾病中胆管上皮标志物CK19和EMT发生标志物