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脓毒症动物模型研究进展 脓毒症是一种由感染引起的临床综合征，通常导致全身范围内的一系列炎症反应。在后期，死亡率很高，这增加了世界卫生资源的负担。脓毒症有4个分期:全身炎症反应综合征 (SIRS) 、脓毒症、严重脓毒症以及脓毒症休克。脓毒症后期主要表现为全身器官衰竭 (尤其在严重脓毒症期) , 最终导致难以逆转的循环衰竭 (脓毒症休克) 。肺、胃肠道、泌尿生殖道以及血液循环感染是绝大多数脓毒症患者的初始感染灶。脓毒症炎症状态存在两种截然不同的免疫反应现象:SIRS特点是产生过多促炎介质因子, 使机体早期处于高炎症反应状态, 而随后发生的代偿性抗炎症反应综合征 (CARS) 则使机体逐渐转入低炎症反应状态。当SIRS发展到CARS过程的某一阶段时, 机体内促炎介质因子和抗炎介质因子可达成某种平衡, 称为混合型炎症反应综合征 (MARS)。SIRS与CARS失衡或扩大化, 均会导致宿主发生过度炎症反应, 或因免疫功能抑制而受到间接伤害。 为更好的研究脓毒症发病机制与治疗措施, 现已设计出多种与脓毒症发病类似的动物模型。其相似点是尽可能模仿临床患者体内所出现的病理变化。其优点在于可控性强, 实验中变量因素少, 可以选择性在不同条件下更好地观察免疫、循环、代谢等变化。 脓毒症患者最常见的感染源来自腹腔且易造成腹腔内感染, 因此腹腔感染模型是目前最常采用的脓毒症动物模型。鼠类盲肠结扎穿孔 (CLP) 与腹腔持续置管引流 (CASP) 是临床研究脓毒症常用的两种模型, 均模仿腹腔脓毒症感染的临床过程, 引起多菌群感染, 最终导致SIRS。 一、 细胞生物学模型 Hubbard等指出理想的脓毒症动物模型应具备以下标准:脓毒症动物存在毒血症、细菌血培养呈阳性;动物模型表现出特征性代谢及生理学紊乱, 脓毒症感染超过一定时间使动物机体内产生相应反应;同时该动物模型成本小, 重复性好, 见表1。 国内学者提出脓毒症动物模型应包括有脓毒症典型的高排低阻血流动力学表现和高代谢状态;伴发多个器官功能障碍;有较高的自然病死率;出现器官功能障碍及动物死亡距脓毒症模型制备应有一定的时间间隔。 近年来随着科学技术的发展, 不同种属的动物被应用到研究中。小型哺乳动物如大鼠、小鼠或豚鼠多用于有关生存率的研究;大型哺乳动物, 如猪、羊、狗和灵长类则适于观察发病过程和症状表现。此外, 具有明确基因特征的同系繁殖动物, 如内毒素耐受型和内毒素敏感型小鼠, 已广泛用于研究脓毒症和感染的病理、生理变化, 而特定基因敲除和转基因品系的动物则成为从分子水平揭示脓毒症发病机制和进行防治研究的重要工具。动物模型的年龄、性别、品系与生长环境也是在选择模型时值得考虑的因素。Turnbull等通过对同一品系不同年龄小鼠CLP模型比较发现, 年老小鼠较年轻小鼠对CLP模型更为敏感, 其生存率明显降低, 且血浆细胞因子水平显著提升。在创伤出血等打击后, 雌性小鼠的免疫反应较雄性小鼠低。比较C57BL6小鼠与BALB/c小鼠, 感染更易于诱导前者出现Th1反应。Kiank等报道脓毒症动物模型处于不同温度及压力下会影响体内免疫水平及脓毒症发展过程, 其预后也不一样。近期研究表明, 一些动物模型可以模拟出人类脓毒症免疫炎症和凋亡的特征表现。虽然还未对这些动物模型与临床的相关性进行评价, 但可靠地模拟出人类脓毒症免疫系统的变化过程, 将是今后建立动物模型的标准之一。总之, 对于不同的研究内容, 选择合适的脓毒症模型至关重要。 二、 clp模型的临床应用 CLP模型是用于研究脓毒症及脓毒症休克最广泛的一种模型。其原理是腹腔内感染形成腹膜炎, 多重病原体感染导致SIRS、脓毒症、脓毒症休克甚至死亡。CLP模型的标准步骤主要参考Rittirsch等的报道, 其方法是在盲肠近端处结扎, 并用无菌针在已结扎盲肠远端贯通穿刺盲肠壁造成穿孔, 粪便流入腹腔引起混合性细菌感染及坏死组织处炎症反应, 动物模型很快出现典型脓毒症及脓毒症休克的表现。CLP模型模仿临床上阑尾炎穿孔或憩室炎穿孔的特点, 并一直被认作是脓毒症研究动物模型的“金标准”。 CLP模型不仅易于标准化, 还可以引入多种不同变量, 因此在实验室被广泛应用。CLP模型有直接的感染病灶, 也可以通过外科手术复原。CLP模型被广泛应用的另一重要原因就是其多用途性, 包括研究细胞功能紊乱、细胞因子分泌模式、性别/激素的影响、组织动力学和凋亡程序等。值得注意的是, CLP模型可以模仿人类脓毒症中不同阶段血液动力学及代谢的变化, 选择性观察不同细胞群的凋亡过程及宿主免疫反应, 为建立临床模型提供参考。 在CLP脓毒症模型的研究过程中, 有数据表明大鼠体内白细胞介素6 (IL-6) 的表达与CLP导致的脓毒症和大鼠生存率有很大关联, 这点与临床观察到的现象相近。CLP