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日落黄和-胡萝卜素与bsa相互作用的光谱学研究 日落下，通常用于食品和药物的颜色。从长远来看，过度添加过量的异氮色素会加重肝脏的解毒负荷，严重损害肝脏的功能。根据研究，长期使用人造药物会影响儿童的智力，导致焦虑和其他行为障碍。它是自然界中普遍存在和稳定的天然颜色。它的颜色和浓度随浓度而不同，它可以覆盖从红到黄的所有颜色。因此，它被广泛应用于食品行业。它是一种自然界普遍存在且相对稳定的自然色素。这种本身的颜色和浓度随浓度而不同，它可以覆盖从红到黄的所有颜色。因此，它被广泛应用于食品行业。它适用于发展石油、食品产品和蛋白质产品，如人造奶油、胶囊、鱼浆果粉、素食品品和速食面的颜色。此外，它还起到了重要的作用，如日夜腐烂和日落下的黄色和柳树的分子形状（scheme1）。随着社会的发展和生活质量的提高，人们怀疑合成色素是否对健康产生了危害。在日常生活中，人们需要添加天然食用色素，但会逐渐减少含有合成色素的食物。 牛血清白蛋白(BSA)是生命体血浆中含量最丰富的蛋白质,具有贮藏内源代谢产物和外源药物小分子等重要生理功能.有关小分子与牛血清白蛋白相互作用的研究十分活跃,目前这方面研究主要集中在药物及一些有机小分子污染物与牛血清白蛋白的相互作用,而食品添加剂特别是食用色素与之相互作用的研究较少.本文在模拟人体生理p H条件下,采用荧光光谱法、紫外吸收光谱法、红外光谱法和圆二色谱法研究日落黄和β-胡萝卜素与BSA的相互作用,获得它们与BSA结合过程的结合常数和热力学常数等基本信息以及对BSA构象的影响,并比较两者与BSA相互作用过程的差异性. 1 实验部分 1.1 实验仪器和溶液 PE LS-55荧光分光光度计(美国,带恒温槽装置),配有1.0 cm荧光比色皿;Agilent 8453紫外-可见分光光度计(美国)配有1.0 cm比色皿;Thermo-Nicolet 380傅立叶红外(FT-IR)光谱仪(美国);MOS-450 AF-CD圆二色光谱仪(法国). BSA(合肥博美生物科技有限公司,纯度99%,分子量68000)用二次水配制成1.28×10-3和5.0×10-5mol/L储备液,于1~4℃冰箱中保存.β-胡萝卜素(美国Sigma公司)用N,N-二甲基甲酰胺(DMF)配制成8.0×10-5mol/L标准使用液(由于β-胡萝卜素对光和热敏感,溶液都是现配现用).日落黄用二次水配制成4.0×10-3mol/L储备液.缓冲液为Tris-HCl溶液(p H=7.40):先配制0.2 mol/L的Tris溶液,准确称取2.422 g三羟基甲基氨基甲烷(上海蓝季科技发展公司),溶于二次水中后,再移入100 m L的容量瓶中并定容,取出25 m L于100m L的容量瓶中,再加入45 m L 0.1 mol/L的盐酸溶液,用二次水定容.实验中所用水均为二次蒸馏水. 1.2 实验方法 1.2.1 日落黄和-胡萝卜素荧光光谱的测定 固定激发波长为280 nm,入射和发射狭缝宽均为10 nm,扫描速度为1200 nm/min,记录250~600 nm的荧光光谱.实验1:在p H=7的Tris-HCl缓冲溶液中,固定BSA的浓度(1.0×10-7mol/L),然后加入不同浓度的日落黄或β-胡萝卜素(0~1.28×10-6mol/L,每次间隔8.0×10-8mol/L),混合均匀后静置5 min,至反应平衡,扫描其荧光光谱.实验2:固定BSA的浓度为1.0×10-7mol/L,然后加入不同浓度的日落黄(0~1.28×10-6mol/L,每次间隔1.6×10-7mol/L)或β-胡萝卜素(0~3.2×10-7mol/L,每次间隔4.0×10-8mol/L),混合均匀,放置5 min,在温度298,303和308 K下测其荧光光谱. 1.2.2 测定200400nm的吸收光谱 在p H=7的Tris-HCl缓冲溶液中,固定BSA的浓度(5.13×10-6mol/L),不断加入日落黄(0~3.46×10-5mol/L,每次间隔2.67×10-6mol/L)或β-胡萝卜素(0~1.74×10-5mol/L,每次间隔1.33×10-6mol/L),记录200~900 nm的吸收光谱. 1.2.3 红外光谱和圆二色谱分析 分别采集BSA(1.01×10-3mol/L)溶液和混合液(药物和BSA浓度比为1∶1,4∶1,8∶1,12∶1和16∶1)的红外光谱,扫描范围为2000~1000 cm-1,扫描次数为32次,取其平均值. 在p H=7的Tris-HCl缓冲溶液中,固定BSA的浓度(1.67×10-7mol/L),分步加入日落黄溶液(使[SY]∶[BSA]=0,1,2,4,8,16和32).在恒定充氮的条件下,记录190~280 nm范围内的圆二色光谱,扫描速度为1n