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毛果芸香碱脂质体滴眼剂的制备及质量评定 硝酸钠是m-胆碱的受体激动剂，能减少瞳孔体积和眼睛压力。它是抗高血压药物，历史悠久，治疗效果准确。目前市场上的常用剂型为其水溶液, 作用时间短暂, 需一日多次给药, 给患者带来很大的不便, 且增加了局部和全身性的不良反应。脂质体技术是国内外迅速发展起来的新型药物传递技术, 用于眼部给药, 不但能增加药物对角膜的穿透性, 延长药物在眼部的停留时间, 还能缓慢释放药物, 显著降低不良反应。因此, 为了增加毛果芸香碱滴眼剂的顺应性, 进一步提高对青光眼的治疗效果, 降低不良反应, 本研究将其制成脂质体, 考察并优化了脂质体的处方, 并对其各种理化性质进行了测定。 1 药品、试剂与仪器 LC-10AT型高效液相仪 (日本岛津公司) ;JEM-1200EX电子透射镜 (日本电子公司) ;激光粒度测定仪 (美国PSS公司) ;硝酸毛果芸香碱 (Bioehriger Ingelheim制药公司, 批号101554) ;蛋黄卵磷脂 (德国Lipoid公司, 批号108006-1) ;胆固醇 (进口分装, 批号031220) ;其他试剂均为分析纯。 2 方法和结果 2.1 色谱柱、粒度 流动相:甲醇-0.1mol·L-1醋酸钠-稀醋酸缓冲液 (pH4.5) (25∶75) ;色谱柱:Alltima ODS-C18;粒度:5μm;流速:1mL·min-1;检测波长:230nm;进样量:20μL。在该色谱条件下, 毛果芸香碱的保留时间为5.0min。 2.2 标准曲线方程 精密称取50mg左右的毛果芸香碱, 置25mL量瓶中, 加流动相至刻度, 震摇溶解。精密移取1, 2, 4, 6, 8, 10mL置于25mL量瓶中, 加流动相至刻度, 摇匀, 取20μL进样, 测定峰面积, 以峰面积对浓度作图, 得标准曲线方程为A=5 567C-154 234, r=0.999 6。说明在0.08～0.8g·L-1范围内, 药物质量浓度和峰面积线性良好。 2.3 包封率正交试验结果 根据文献和预实验结果, 选择对包封率影响较大的药物/脂质比、磷脂/胆固醇比、有机相/水相体积比3个因素, 各取3个水平, 选用L9(34) 正交表进行正交试验, 以包封率为指标, 确定最佳处方。处方因素与水平见表1, 正交试验结果和直观分析结果见表2。从表2中可看出, 有机相和水相的体积比对包封率的影响最大, 磷脂和胆固醇比例的影响最小。根据该结果确定毛果芸香碱脂质体的最佳处方组成为2.5%硝酸毛果芸香碱4mL, 卵磷脂0.2g, 胆固醇0.07g, 氯化钠0.08g, 羟苯乙酯适量,pH7.4磷酸缓冲液加至10mL。 2.4 蒸发、制备 采用逆相蒸发法。称取处方量的卵磷脂和胆固醇, 加入20mL乙醚溶解, 置旋转蒸发仪上减压蒸发成膜。再加入20mL乙醚使膜重新溶解, 加入毛果芸香碱水溶液, 短时超声形成稳定的W/O型乳状液。减压蒸发除去乙醚, 达到胶态后, 滴加pH7.4的磷酸缓冲液, 剧烈振摇使瓶壁上的凝胶脱落, 继续旋转水化2h, 即得。 2.5 游离药物包封率测定 采用超速离心法。取脂质体适量置超速离心管中, 以70 000r·min-1离心2h, 取上清液适当稀释后进样, 按“2.1”所述的HPLC法测定游离的药物质量浓度, 按下式计算包封率:包封率= (1-游离药物/总药物) ×100%。各个处方所得的包封率如表2所示。利用最佳处方制得脂质体的药物包封率为47.42%。 2.6 脂质体形态检测 脂质体适当稀释后, 用2%的磷钨酸负染, 自然风干后, 用透射电子显微镜观察并拍照, 结果如图1所示。从图1中可看出, 所得的脂质体形态归整, 呈球形。 另取样品适量用激光粒径测定仪测其粒径及分布, 测得数均粒径为69.5nm, 50%小于81.8nm, 90%小于168.9nm, 99%小于334.8nm。 2.7 累积释放百分率测定 取1mL载药脂质体于透析袋中, 放入装有100mL生理盐水的锥形瓶中, 37 ℃的恒温振荡器中振荡 (100r·min-1) , 分别在10, 30min, 1, 2, 4, 8h取1mL释放液 (同时补加1mL生理盐水) , 用2.1所述的HPLC法测定药物含量, 计算累积释放百分率。同时以相同浓度的毛果芸香碱水溶液作平行对照, 评价脂质体的缓释性能, 结果如图2所示。 3 最佳配方的确定 自从1981年Smolin等首次采用脂质体包封碘苷用于治疗实验性单纯疱疹病毒性角膜炎取得良好的结果后, 脂质体在眼部给药系统中的应用受到了广泛的重视。作为眼部给药载体, 其具有以下优点:1) 增加药物在眼部的停留时间, 延长药物的作用;2) 缓慢释放药物, 降低药物的毒性;3) 增加药物对角膜的通透性, 提高药物的疗