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土茯苓及其有效成分落新妇苷的药效学研究 土耳其系百合科植物光叶smilx805；干燥的根系，具有除湿、解毒、关节和其他功能。据报道, 土茯苓水提物有明显的抗炎作用, 从土茯苓中提取分离的落新妇苷具有明显的利尿及镇痛作用。本文探讨了土茯苓及落新妇苷除湿利关节作用, 为土茯苓品种质量标准化研究提供药理依据。 1 材料表面 1.1 落新妇苷的药物 土茯苓药材购自成都市荷花池中药材市场, 经本所生药室鉴定确认。土茯苓水煎醇沉物 (SGR) 每克含原生药7.8g;落新妇苷 (astilbin) 为无色针状结晶, 含量98.90%, 由本所药化室提供, 用前以无菌NS配成所需浓度。速尿注射液批号:020102, 西安药业股份公司;消炎痛25mg/片批号:0206052, 江苏林海药业有限公司。角叉菜胶及尿酸钠 (MSU) 均为 SIGMA公司出品, 用前以无菌NS配制。 1.2 川实动字2号 SD种大鼠雄性, 体重160±20g, 一级, 合格证号:川实动字第2002-32号;昆明种小鼠, 体重20±2g或28±2, 一级, 合格证号:川实动字第2002-33号, 均由四川省中药研究所实验动物室提供。 2 方法和结果 2.1 双耳片之水肿程度测定 小鼠50只, 雌雄各半, 20±2g, 随机分为5组, ig给药, 每日1次共4天。末次给药后40min, 在小鼠右耳涂30μl二甲苯致炎, 30min后处死动物, 剪下双耳, 用6mm直径打孔器取双耳片分别称重, 两耳片之差为肿胀程度。结果模型对照、SGR 5、10、15g/kg及氢化可的松20mg/kg组肿胀程度分别为11.50±3.21mg、7.30±2.28mg (P0.01) 、7.90±2.80mg (P0.05) 、7.80±2.04mg (P0.05) 及5.10±2.41mg (P0.01) , 表明SGR对二甲苯所致小鼠耳肿胀有显著抑制作用。 2.2 小鼠致炎试验 小鼠40只雄性, 体重28±2g, ig给药, 每日1次共4天。末次给药后30min, 每鼠右足注入10%蛋清30μl致炎, 1h后自踝关节下0.5cm处剪下双后足跖皮下称重, 以左右足重差为肿胀程度。另取小鼠40只, 雄性, 分组及给药同上, 末次给药后30min, 在小鼠右足注入1%角叉菜胶30μl致炎, 3.5h后按上法称双足重, 求出肿胀程度。从表1可见, SGR与氢化可的松, 均能明显抑制蛋清及角叉菜胶所致的小鼠足肿胀。 2.3 模型对照及给药 MSU所致大鼠痛风性关节炎的影响大鼠40只, 雄性, 体重150±10g, 给药前用投影仪 (放大6倍) 测各鼠右踝关节下0.5mm直径作为自身对照, 模型对照及落新妇苷各组大鼠静脉一次注射NS或药液, 消炎痛组则ig给药。大鼠右后足踝关节内注入1.3%MSU混悬液50μl致炎, 致炎后每小时测各鼠右踝关节下0.5cm处直径一次, 连续测定7次, 以致炎前后测定差值为关节肿胀程度, 表2结果表明, 静注落新妇苷1.5、3.0mg/kg均能明显对抗MSU所致大鼠痛风性关节炎, 消炎痛组亦有相同作用。 2.4 大鼠尿量的计算 用大鼠代谢笼法选择适合用于利尿实验的大鼠50只, 体重160±10g, 雄性, 实验前大鼠自由饮水, 禁食18h, ig NS 25ml/kg 进行水负荷, 尾静脉注入药液或NS, 给药体积均为2ml/kg, 给药后放入大鼠代谢笼, 每小时收集尿液一次, 集尿前后均轻压大鼠下腹排尽余尿。记录给药后1h、2h、3h及4h总尿量, 计算大鼠每100克体重的尿量。从表3结果可见, 落新妇甙各组均能明显增加大鼠尿量, 但利尿作用较速尿组弱。 2.5 阿斯匹林小鼠扭体次数试验 小鼠50只雌雄各半, 20±2g, 静脉注射NS或药液, 给药后15min每鼠ip注入0.7%醋酸10ml/kg, 阿斯匹林每日ig给药一次, 连续2天, 末次给药1h同上法注射醋酸, 记录15 min内小鼠扭体次数。如表4所示, 落新妇苷及阿斯匹林对醋酸所致小鼠扭体反应均有明显抑制作用。 2.6 小鼠痛行为测定 采用XZC-2B型自控温度热板仪, 测定给药前痛阈值, 选取体重20±2g的合格雌性小鼠40只, 随机分为4组, 各鼠分别尾静脉注射给药或NS后, 在1h内每隔15min测定痛阈值。表5结果显示, 落新妇苷10mg/kg, 在给药后30、45、及60min均能延长小鼠痛反应潜伏期, 其痛阈提高率分别为26.37、29.02及31.9%。 3 抗痛风性自动wolbachia 本研究结果表明土茯苓及落新妇苷的抗炎、利尿和镇痛作用, 落新妇苷还具有明显的抗痛风性关节炎作用, 这些作用与土茯苓功效相符, 是临床应用的药理基础之一。研究结果表明, 落新妇苷为土茯苓除湿利关节作用的有